基因是進(jìn)行分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象，將基因片段構(gòu)建上質(zhì)粒的過(guò)程，通常被稱之為目的基因的獲取一般包 括引物設(shè)計(jì)、模板制備 PCR 擴(kuò)增、目的片段回收、酶切與連接轉(zhuǎn)化及最后的測(cè)序鑒定。整個(gè)過(guò)程一般需要兩到三 周的時(shí)間才能完成。

同時(shí)，對(duì)于每個(gè)具體的基因片段來(lái)說(shuō)，引物設(shè)計(jì)需考慮限制酶位點(diǎn)，還要防止由于出現(xiàn)發(fā)夾結(jié)構(gòu)（Hairpin）， 錯(cuò)誤引發(fā)情況（False Priming），及上下游引物之間二聚體形成情況（Cross Dimer）而導(dǎo)致的擴(kuò)增出目的帶之外的雜 帶和不出條帶。PCR 過(guò)程則需要對(duì)退火溫度和試劑配比體系進(jìn)行反復(fù)的摸索和研究。不僅如此，用戶還要自行提取 RNA 以及逆轉(zhuǎn)錄為相應(yīng)的 cDNA 的復(fù)雜的模板制備工作。這些工作極大的阻礙了實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展，花費(fèi)了科研人員的 大量精力。

Cloud-Clone Corp.公司為廣大科研人員和從事制備重組蛋白的人員提供一套可用于目的基因的制備試劑盒 (Target Gene Clone Kit)，我們的試劑盒為用戶省去繁瑣的引物設(shè)計(jì)與合成、模板獲取的工作，PCR 條件摸索以及為 購(gòu)買到各種合適的工具酶和進(jìn)行引物合成的而耗去的寶貴的時(shí)間。用戶只需提供目的基因的名稱或者序列，按我們 的說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，即可在 2 天內(nèi)獲取想要的基因片段。

Target Gene Clone Kit 提供了目的基因克隆的整個(gè)過(guò)程的配套試劑。

包括：從引物、模板、PCR Mix 和各種工具酶。

試劑盒組成成分：

模板：帶目的基因的 cDNA 片段；

引物對(duì)：PCR 引物對(duì)，提供 1 OD（可供 50ul 體系 100 次試驗(yàn)）；

PCR 預(yù)混 Mix： Buffer，dNTP，Mg2+ ；

工具酶：高保真 DNA 聚合酶，T4 連接酶；

以 Human IL-11 基因克隆試劑盒為例

1.實(shí)驗(yàn)操作信息

1.1 提供 PCR 引物對(duì)序列信息；

IL-11-Hu-上游：ATACGAATTCCCTGGGCCACCACCT

（長(zhǎng)度 25bp；酶切位點(diǎn)：EcoRⅠ）

IL-11Hu-下游：CGCCAAGCTTTCACAGCCGAGTCTT

（長(zhǎng)度：25bp；酶切位點(diǎn)：HindⅢ）

1.2 提供 PCR 退火溫度；

PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度 557bp；退火溫度：56

1.3 提供試劑最佳的配比體系；

取滅過(guò)菌的 0.2ml PCR 管，參考如下表格設(shè)置反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（50 μL 反應(yīng)體系）：

1.4 提供擴(kuò)增基因的序列信息；

CCTGGGCCACCACCTGGCCCCCCTCGAGTTTCCCCAGACCCTCGGGCCGAGCTGGACAGCAC

CGTGCTCCTGACCCGCTCTCTCCTGGCGGACACGCGGCAGCTGGCTGCACAGCTGAGGGACA

AATTCCCAGCTGACGGGGACCACAACCTGGATTCCCTGCCCACCCTGGCCATGAGTGCGGGG

GCACTGGGAGCTCTACAGCTCCCAGGTGTGCTGACAAGGCTGCGAGCGGACCTACTGTCCTA

CCTGCGGCACGTGCAGTGGCTGCGCCGGGCAGGTGGCTCTTCCCTGAAGACCCTGGAGCCCG

AGCTGGGCACCCTGCAGGCCCGACTGGACCGGCTGCTGCGCCGGCTGCAGCTCCTGATGTCC

CGCCTGGCCCTGCCCCAGCCACCCCCGGACCCGCCGGCGCCCCCGCTGGCGCCCCCCTCCTC

AGCCTGGGGGGGCATCAGGGCCGCCCACGCCATCCTGGGGGGGCTGCACCTGACACTTGACT

GGGCCGTGAGGGGACTGCTGCTGCTGAAGACTCGGCTGTGA

2.產(chǎn)品檢測(cè)報(bào)告：

2.1.引物對(duì)合成檢測(cè)報(bào)告；