在Western Blot（WB）的實驗過程中，總會遇到各種各樣的問題：沒有條帶，雜帶多，轉(zhuǎn)膜不成功，曝光時間把握不好……不要著急，根據(jù)多年的WB經(jīng)驗，我們總結(jié)了以下WB實驗過程中出現(xiàn)各種突發(fā)狀況的分析和處理方法：1.SDS-PAGE出現(xiàn)異常條帶1）微笑現(xiàn)象處理方法：可能是由于凝膠的中間部分凝固不均導(dǎo)致，待其充分凝固后再做實驗。2）拖尾現(xiàn)象處理方法：可能是由于樣品融解效果不佳或分離膠濃度過大引起。建議：加樣前離心；加適量樣品促溶劑；電泳緩沖液時間過長，重新配制；降低凝膠濃度。3）條帶粗處理方法：可能是由于濃縮膠未濃縮好。......

Q1:ELISA代測需要用到的儀器A1:ELISA代測需要儀器如下：1、酶標儀Microplate reader 廠家：Biotek; 型號：ELx8082、恒溫箱Incubator 廠家：sanyo; 型號：MIR-2623、洗板機Microplate Washer廠家：北京拓撲分析儀器有限公司; 型號：DEM-3型Q2:不知道如何完成標曲擬合和樣本測算？需要用到什么軟件。A2:用EXCEL軟件即可完成樣本的測算。其中雙抗夾心試劑盒參看雙抗夾心ELISA試劑盒標曲擬合及樣本測方法，而競爭抑制試劑盒參看競爭抑制ELISA試劑盒標曲擬合及樣本測算方法。Q3:用于ELISA檢測的樣本制備方法和保存方法。A3:ELISA檢測的常......

FCM是利用流式細胞儀對處在快速直線流動狀態(tài)中的單列細胞或生物顆粒進行逐個、多參數(shù)、快速的定性、定量分析或分析技術(shù)。然而，在FCM的實際應(yīng)用過程中，要想得到高質(zhì)量的流式數(shù)據(jù)卻并非易事。現(xiàn)就FCM實驗中的常見問題進行分析，希望能幫助相關(guān)實驗人員提高實驗成功率。1. 怎么選擇合適的對照？1）同型對照：使用同型抗體做平行實驗，主要目的是消除抗體與樣本的非特異性結(jié)合。2）陰性細胞對照：使用已知的不表達目標抗原的細胞做平行實驗，主要目的是消除抗體的非特異性結(jié)合。3）二抗對照：第二抗體多為熒光標記的多抗，非特異性結(jié)......

ELISA實驗樣本測值低原因分析和建議解決方案ELISA 實驗中，實驗者經(jīng)常會遇到樣本測值低的問題，針對這一問題，分析了可能原因和解決方法。分析原因解決方法試劑盒保存不當，導(dǎo)致試劑部分或完全失效。請按說明書要求保存試劑盒。檢測液 A、檢測液 B、標準品以及酶標條等儲存在-20 oC，而其它試劑需儲存在 4 oC。樣本反復(fù)凍融，樣本反復(fù)凍融會導(dǎo)致樣本中蛋白降解。收集樣本制備后，需進行分裝后凍存-20oC或-80oC，避免樣本反復(fù)凍融。樣本保存不當或保存時間過長。長時間的儲存有可能導(dǎo)致目標蛋白的降解， 致使檢測結(jié)果不理想。建議使......

蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）是根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理檢測復(fù)雜樣本中的某種蛋白的方法。將混合抗原樣本在凝膠板上進行單向或雙向電泳，經(jīng)過 PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與或標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于鑒定蛋白以及對蛋白進行定性和半定量分析。蛋白質(zhì)印跡分為蛋白質(zhì)分離、......

免疫組織化學(xué)技術(shù)又稱免疫細胞化學(xué)技術(shù)，是指用標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原進行定性、定位、定量測定的一項免疫檢測方法。它把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見性和分子生物技術(shù)的敏感性等巧妙結(jié)合，借助顯微鏡的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、病原體以及受體等），是單一的靜止的形態(tài)學(xué)描述，上升到結(jié)構(gòu)、功能和代謝為一體的動態(tài)觀察，為疾病的診斷、鑒別診斷和發(fā)病機制的研究提供了強有力的手段。然而，要想得到一張高質(zhì)......

在酶聯(lián)免疫吸附測定實驗中，每一個步驟或環(huán)節(jié)都需要操作者嚴格控制實驗條件，否則可能會影響到最終結(jié)果?，F(xiàn)就試驗中遇到得常見問題進行分析總結(jié)，給進一步給出解決方案，希望能為幫助相關(guān)實驗人員提供實驗成功率。問題可能原因解決方案標準曲線差標準品準備不正確進行正確的標準品梯度稀釋吸取及洗滌不充分充分的吸取及洗滌移液不精確檢查和校正移液器精密度低洗滌不充分按說明書要求充分洗滌和浸泡混勻不充分和吸取試劑不足充分混勻和吸取試劑重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜加樣不精確檢查......