蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）是根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理檢測復雜樣本中的某種蛋白的方法。將混合抗原樣本在凝膠板上進行單向或雙向電泳，經(jīng)過 PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與或標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)廣泛應用于鑒定蛋白以及對蛋白進行定性和半定量分析。

蛋白質(zhì)印跡分為蛋白質(zhì)分離、蛋白質(zhì)印跡和蛋白質(zhì)鑒定三個步驟。每個步驟和環(huán)節(jié)都可能影響到最終結(jié)果, 要想獲得理想的實驗結(jié)果，每個步驟都不能馬虎。現(xiàn)就實驗中遇到的常見問題進行分析總結(jié)，給出解決方案，以提高蛋白質(zhì)印跡實驗的成功率。

一、蛋白質(zhì)分離-電泳中的問題

蛋白質(zhì)印跡實驗是建立在聚丙烯酰胺凝膠電泳 SDS-PAGE 基礎上的，所以蛋白質(zhì)印跡有些問題是由前期電泳引起的。因此，在此簡單介紹電泳中出現(xiàn)的問題。

出現(xiàn)的問題	可能的原因	處理方法	圖例
1. “ 微笑”（）形帶	凝膠濃度過高； 凝膠中部凝固不均勻，多出現(xiàn)于較厚的凝膠中； 電泳系統(tǒng)溫度偏高	選擇合適濃度的凝膠；待凝膠充分凝固后再做實 驗；水浴降溫電泳
??2. “皺眉”（）形 帶	裝置不合適，特別可能是凝膠和玻璃擋板底部有氣泡。	可在兩板間加入適量緩沖液，以排除氣泡
3. 拖尾	樣品融解效果不佳，分離膠濃度過大引起的	加樣前離心；選擇適當?shù)臉悠肪彌_液，加適量樣品促溶劑； 重新配制電泳緩沖液；降低凝膠濃度
???4. 紋理	樣品不溶性顆粒引起的	加樣前離心；加適量樣品促溶劑
5. 條帶偏斜	電極不平衡或者加樣位置偏斜	檢查電極是否接觸良好； 拔梳子的時候動作輕柔，保證加樣孔的平坦
6. 條帶向兩邊擴散	加樣量過多	樣本在上樣前先進行蛋白定量，根據(jù)具體濃度選擇 合適的上樣量

二、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印-轉(zhuǎn)膜中的問題

轉(zhuǎn)膜是蛋白質(zhì)印跡實驗中關(guān)鍵的一步。轉(zhuǎn)膜不完全和轉(zhuǎn)膜過度都會導致轉(zhuǎn)膜效率低，而導致在檢測鑒定時出現(xiàn)信號弱或無信號的情況。優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件可有效提高轉(zhuǎn)膜效率。

轉(zhuǎn)膜中的常見問題及解決方法：