IL-6 是白細胞介素的一種，在機體中可發(fā)揮促炎和抗炎兩種功能，是一種 典型的前炎性細胞因子，由 IL-6 基因編碼。T 細胞和巨噬細胞在遭遇病原體等 外來物質(zhì)入侵時，會進行分化增殖，產(chǎn)生大量 IL-6，刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答， 在感染、創(chuàng)傷、燒傷或其它組織損傷導(dǎo)致的炎癥部位，IL-6 水平會顯著性上調(diào)。 IL-6 可通過 TNF-alpha 和 IL-1 進行負反饋調(diào)節(jié)，通過 IL-1ra 和 IL-10 進行正反 饋調(diào)節(jié)。在臨床研究中，已發(fā)現(xiàn) IL-6 與很多系統(tǒng)的疾病存在廣泛的聯(lián)系，如牙 周炎、急性心肌梗塞、妊娠期高血壓、前列腺癌及腫瘤等。

隨著 IL-6 研究的不斷深入，Cloud-Clone Corp.公司開發(fā)了一系列不同物種 IL-6 的重組蛋白、抗體以及 ELISA 定量檢測試劑盒，特別是針對樣本中 IL-6 含量不高的問題，公司研發(fā)了具有高靈敏度的 IL-6 Elisa 檢測試劑盒，并將試劑 盒中的高純度、高特異性的單抗進行了商品化。

人 IL-6 天然蛋白全長 212 個氨基酸，分子量約為 24 kDa，因為前面 29 個 氨基酸是信號肽，Cloud-Clone Corp.選取了 Pro29~Met212 這一片段在 E.coli 中 進行表達得到重組蛋白（RPA079Hu01）。由于含有 GST 標簽，重組蛋白分子量 約為 47kD，對重組蛋白進行 SDS-PAGE 驗證其分子量以及純度，如圖 1。

用 RPA079Hu01 重組蛋白免疫家兔并用偶聯(lián)抗原的親和柱層析進行純化獲 得高純度的兔抗人 IL-6 多克隆抗體（PAA079Hu01）。將 PAA143Hu01 與生物素 偶聯(lián)得到（PAA079Hu71）生物素偶聯(lián)多抗，帶有生物素標記后，可更方便更直 接對體內(nèi)外 IL-6 進行檢測。通過 Western Blot 和 IHC 等方法對抗體進行驗證。 用 PAA079Hu01 對血漿樣本進行 WB 檢測，結(jié)果如圖 2 所示。用人肝臟組織進 行 IHC 檢測結(jié)果展示于圖 3 中，結(jié)果顯示在人肝臟組織中該蛋白主要是分泌型。

在 IL-6 重組蛋白和及其抗體研發(fā)成功的基礎(chǔ)上，Cloud-Clone Corp.研發(fā)了 IL-6 檢測試劑盒，包括 Elisa 試劑盒（SEA079Hu）以及化學(xué)發(fā)光試劑盒 （SCA079Hu）。

但我們都知道 IL-6 在正常機體中含量很低，只有在感染、創(chuàng)傷燒傷或其它 組織損傷導(dǎo)致的炎癥機體才會刺激 IL-6 的產(chǎn)生，所以許多生物樣本 IL-6 含量很 低。針對這一問題，公司反復(fù)研究獲得了高純度，高特異性的小鼠抗人單克隆 抗體 MAA079Hu22，它是由 RPA079Hu01 重組蛋白免疫小鼠并經(jīng)過親和層析純 化得到，在進行 SDS-PAGE，WB 以及 IHC 時只需要微量就具有很高的檢測能 力。

在高純度，高特異性的單抗基礎(chǔ)上，公司不斷調(diào)整獲得了具有高靈敏度的 IL-6 Elisa 檢測試劑盒（HEA079Hu）。靈敏度是指 20 個空白樣品(即標準品稀釋 液)測定的平均值加二倍標準差所對應(yīng)的濃度。高敏試劑盒最低檢測濃度為 0.156 pg/ml，靈敏度為 0.047 pg/ml；相較于 SEA079Hu 的 1.56 pg/ml，靈敏度 0.64 pg/ml， 提高了十倍或以上。

除了人 IL-6 的產(chǎn)品外，Cloud-Clone Corp.公司還成功開發(fā)了包括大小鼠、 兔、狗等 10 個物種約 70 種 IL-6 相關(guān)產(chǎn)品，有蛋白、抗體、生物素偶聯(lián)抗體、 Elisa 試劑盒、化學(xué)發(fā)光試劑盒等，也有大鼠的高敏試劑盒，這些產(chǎn)品為研究不 同物種中 IL-6 的表達及功能提供了非常完善的技術(shù)支持。

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