轉化生長因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β)屬于一組新近發(fā)現(xiàn)的調 節(jié)細胞生長和分化的 TGF-β超家族，廣泛存在于動物正常組織細胞核轉化細胞 中，具有促進胚胎發(fā)育、調節(jié)免疫、生長抑制、創(chuàng)傷修復、促進血管生成和細 胞外基質沉淀等功能。由于這種細胞因子可促使正常的成纖維細胞的表型發(fā)生 轉化，協(xié)同表皮生長因子，改變成纖維細胞貼壁生長特性，從貼壁依賴性生長 轉變?yōu)橘N壁非依賴性生長的一類物質，故得以命名。

哺乳動物中目前發(fā)現(xiàn)有 3 種 TGF-β，分別為 TGF-β1、TGF-β2 和 TGF-β3。 它們分別位于不同的染色體上，其氨基酸序列之間有 70-80%的同源性。三種 TGF-β中，TGF-β1 在體細胞系中所占比例最高(>90% )，活性最強。TGF-β1 可 由巨噬細胞、淋巴細胞、內(nèi)皮細胞和軟骨細胞產(chǎn)生，也可由白血病細胞產(chǎn)生， 主要分布于人血小板和哺乳動物骨中；TGF-β2 可由角化細胞、顆粒層細胞和神 經(jīng)膠質細胞瘤細胞產(chǎn)生；TGF-β3 以間充質起源的細胞產(chǎn)生為主。

機體內(nèi)細胞內(nèi)產(chǎn)生的 TGF-β為非活性同型二聚體的前體分子。合成后， TGF-β同型二聚體與延遲相關肽（Latency Associated Peptide, LAP）（轉化生長因 子β N 端皆具有一個長 20~30 個氨基酸序列）形成的復合稱為小潛伏復合物 （Small Latent Complex, SLC）。在細胞內(nèi)，SLC 與 TGF-β結合蛋白（Latent TGF-β-Binding Protein, LTBP）結合形成了復雜的大潛在復合物（Large Latent Complex, LLC）。TGF-β以 LLC 的形式由細胞分泌到細胞外基質（extracellular matrix, ECM）。也就是說在血清血漿等生物樣本中，大多數(shù) TGF-β是以 LLC 的 形式存在，由于本試劑盒中的抗體是特異性地識別游離的 TGF-β，要達到定量 檢測生物樣本中的 TGF-β的目的，需要將樣本作前處理釋放 TGF-β，即是 TGF-β 與結合蛋白解離成游離的 TGF-β蛋白。具體的操作方法如下：

[樣本前處理步驟]

1、 血清/血漿

1） 取 50μL 樣本，加入 10μL 1N HCl，混勻。

2） 室溫靜置 10min。

3） 加入 10μL 1.2N NaOH/0.5M HEPES，混勻。

4） 加入 80μL 標準品稀釋液，混勻后即可檢測（2h 內(nèi)檢測）。

5） 計算結果時應乘以相應稀釋倍數(shù)（3）。

2、 細胞培養(yǎng)上清

1） 取 100μL 細胞培養(yǎng)上清，加入 20μL 1N HCl，混勻。

2） 室溫靜置 10min。

3） 加入 20μL 1.2N NaOH/0.5M HEPES，混勻后即可檢測（2h 內(nèi)檢測）。

4） 計算結果時應乘以相應稀釋倍數(shù)（1.4）。

以人 TGF-β1 定量檢測試劑盒 SEA124Hu 為例, 我們對比血清樣本處理前和 處理后的測值。發(fā)現(xiàn)前處理后，LLC(TGF-β1 與 LAP 及 LTBP 的結合蛋白)解離 成游離的 TGF-β1 蛋白，樣本測值有明顯地升高。結果如圖 1。直接檢測未經(jīng)處 理的樣本，則無法準確顯示血清血漿樣本中 TGF-β1 的含量。也就是說，為準確 檢測生物樣本中的 TGF-β1，建議先將樣本作前處理。

轉化生長因子-β系列產(chǎn)品及發(fā)表文獻信息如下，敬請關注。