自噬（autophagy）是由 Ashford 和 Porter 在 1962 年發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)有“自己 吃自己”的現(xiàn)象后提出的，是指從粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的無核糖體附著區(qū)脫落的雙層膜 包 裹 部 分 胞 質(zhì) 和 細(xì) 胞 內(nèi) 需 降 解 的 細(xì) 胞 器 、 蛋 白 質(zhì) 等 成 分 形 成 自 噬 體 （autophagosome），并與溶酶體融合形成自噬溶酶體，降解其所包裹的內(nèi)容物， 以實現(xiàn)細(xì)胞本身的代謝需要和某些細(xì)胞器的更新。自噬是繼凋亡（apoptosis）后， 當(dāng)前生命科學(xué)最熱的研究領(lǐng)域之一，根據(jù) Pubmed 記錄的文獻(xiàn)數(shù)量，2006 年以 前其相關(guān)文獻(xiàn)大約 1500 條。2007 年至 2010 年 9 月其相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)表量達(dá)到大約 4400 條。

但是，關(guān)于自噬的檢測，一直是研究者們頭痛的一個問題。細(xì)胞自噬的金 標(biāo)準(zhǔn)是在電鏡下觀察到被稱為 Phagophore 的吞噬泡，如圖 1 所示，在自噬不同 時期可觀察到不同形態(tài)的吞噬泡。雖然電鏡可直接觀察到自噬，但由于需要電 鏡設(shè)備和一定的實驗技能，其無法滿足所有研究者的需要。因此，常規(guī)還可利 用 LC3 的抗體，通過 Western Blot 檢測 LC3-II/I 比值的變化以評價自噬的發(fā)生發(fā) 展。當(dāng)自噬形成時，胞漿型 LC3 會酶解掉一小段多肽形成 LC3-I，LC3-I 跟 PE 結(jié)合轉(zhuǎn)變?yōu)椋ㄗ允审w）膜型（即 LC3-II）。

圖 1. 透射電鏡下觀察不同時期的自噬泡 (源引自：Madame Curie Bioscience Database)

除此之外，GFP-LC3 單熒光體系和 mRFP-GFP-LC3 雙熒光體系也廣泛應(yīng)用 于自噬檢測中。通過轉(zhuǎn)染或感染等方法，研究者可將 GFP-LC3 表達(dá)于目標(biāo)細(xì)胞 中，再通過熒光顯微鏡下觀察 GFP 的數(shù)量、強(qiáng)弱等來對細(xì)胞的自噬形成來進(jìn)行 檢測。

隨著近年來酶聯(lián)免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)技術(shù)的發(fā)展，研究者們發(fā)現(xiàn)通過 ELISA 的方法檢測自噬相關(guān)基因，也可 很方便地對細(xì)胞的自噬情況進(jìn)行評價。自噬相關(guān)基因(autophagy associated gene, ATG)，顧名思義，是指直接參與或調(diào)節(jié)自噬相關(guān)過程的基因，目前已發(fā)現(xiàn) 的 ATG 有 16 種，命名從 ATG1-ATG16，其中 ATG8 也被稱為 LC3，ATG6 也被 稱為 Beclin-1。 Cloud-Clone Corp.據(jù)此開發(fā)一系列的 ATG 蛋白檢測試劑盒，包 括 ATG12 檢測試劑盒（SEL224Hu）、ATG16L1 檢測試劑盒（SEN942Hu）、 ATG5 檢測試劑盒（SEL221Hu）、ATG7 檢測試劑盒（SEL222Hu）、BECN1 檢測試劑盒（SEN942Hu）、ATG16L1 檢測試劑盒（SEN942Hu）、ATG16L1 檢測試劑盒（SEJ557Hu）等。這些產(chǎn)品均為科研用戶研究自噬相關(guān)機(jī)制提供了 良好的實驗平臺。

與其它檢測手段相比，ELISA 檢測細(xì)胞自噬具有簡便、省時、無需電鏡或 熒光顯微鏡等大型儀器、可同時檢測多個樣品等優(yōu)點，為研究自噬的機(jī)理提供 了更方便的產(chǎn)品支持。

更多相關(guān)產(chǎn)品，請登錄 http://www.cloud-clone.us/。