競爭抑制ELISA法是指將特異性抗體吸附于固相載體，隨后加入待測抗原（標(biāo)準(zhǔn)品和樣本）和一定量的生物素標(biāo)記的抗原（檢測液A），使二者競爭與固 相抗體結(jié)合，溫育后經(jīng)洗滌去掉未結(jié)合物，然后加入HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過溫育和徹底洗滌后加入底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。待測標(biāo)本濃度越高，標(biāo)記抗原和抗體的結(jié)合就越受到抑制，顯色愈淺。顯色的深淺與酶量呈正相關(guān)，而與樣品中待測物質(zhì)含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。由于生物大分子可標(biāo)記多個生物素，而生物素可以特異性結(jié)合酶標(biāo)親和素，放大檢測信號，提高免疫分析敏感性。

小分子抗原或半抗原因僅有單個抗原表位，缺乏雙抗體夾心法所需的基本條件——具有2個或2個以上表位，所以對其常用競爭法進(jìn)行測定。其原理是將待檢抗原和酶標(biāo)抗原與相應(yīng)固相抗體競爭結(jié)合，標(biāo)本中抗原越多，與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原越少，與底物反應(yīng)生成的顏色越淺，因此根據(jù)顏色深淺可定量測定。原理圖如下：