多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）是指用含有多個(gè)抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物后刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的不同抗體，得到的免疫血清含有多種抗體。多克隆抗體可應(yīng)用于WB、IHC、Elisa、IP等實(shí)驗(yàn)中，是生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域不可或缺的研究伙伴。下面我們會(huì)來(lái)介紹一下多克隆抗體的制備過(guò)程。

1.免疫原的制備

普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。

小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。

2.免疫動(dòng)物

選擇動(dòng)物時(shí)應(yīng)考慮抗原和免疫動(dòng)物的種屬差異，種系相近會(huì)影響免疫效果，一般要求動(dòng)物適齡，健康，體重符合要求。常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。動(dòng)物接受免疫的乳液量小鼠為1.0~2.0 ml， 家兔為2~4 ml。添加佐劑可幫助抗原在注射部位緩慢釋放，增加免疫效果，常用佐劑為弗氏不完全佐劑。

初次免疫后要經(jīng)過(guò)2~3次以上的加強(qiáng)免疫以形成較高水平的IgG抗體。初次免疫和再次免疫之間，小動(dòng)物一般間隔10~14天，大動(dòng)物間隔60天左右。在每次加強(qiáng)免疫后，進(jìn)行抗血清效價(jià)測(cè)定，當(dāng)效價(jià)達(dá)到理想狀態(tài)時(shí)，便采集抗血清。

3.免疫血清的收集

一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。也可采用尾巴或眼眶取血，靜置待血液凝固成血塊收縮析出血清，3000rpm離心15 min，取上清。這個(gè)過(guò)程要注意動(dòng)物的養(yǎng)護(hù)，耗時(shí)長(zhǎng)，但得率低，得到的血清還需進(jìn)一步的純化。

4.免疫血清的純化與鑒定

得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。

5.免疫血清的保存

建議將抗體分裝后進(jìn)行保存。抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

由于多克隆抗體具有成本低、制備周期短且制備步驟相對(duì)簡(jiǎn)單、可識(shí)別多個(gè)表位等優(yōu)點(diǎn)，在科研領(lǐng)域應(yīng)用非常廣泛。以上就是關(guān)于多克隆抗體制備的一個(gè)基本流程。供大家參考。

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