隨著PCR技術(shù)的出現(xiàn)，人們逐漸的打開(kāi)通往研究生命本質(zhì)的大門(mén)，這也使PCR技術(shù)成為了上個(gè)世紀(jì)最為偉大的技術(shù)之一。通過(guò)PCR技術(shù)能在體外迅速、大量、靈敏地?cái)U(kuò)增出目的基因片段，但是需要靈活的改造基因，只有目的基因片段是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，還需要一種高效的基因加工手段——基因拼接技術(shù)。在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，無(wú)論出于基因改造、載體改造以及將來(lái)會(huì)出現(xiàn)的物種改造等多種涉及DNA操作的實(shí)驗(yàn)，都不可避免會(huì)使用到基因拼接技術(shù)。

     1989年Horton等人提出了SOE法（Gene splicing by over lap extension）即通過(guò)復(fù)制時(shí)DNA鏈的交錯(cuò)延伸來(lái)實(shí)現(xiàn)基因拼接；1991年Lebedenko等人提出SDL方法（Gene splicing by directed ligation）即直接拼接法。目前常用的基因拼接技術(shù)大多數(shù)是基于這兩種方式發(fā)展而來(lái)，這些方法雖然能夠完成基因的拼接，但是表現(xiàn)出來(lái)的問(wèn)題也非常多，主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：1、外源片段的引入；2、基因出現(xiàn)移碼突變；3、操作繁瑣，拼接成功率低；4、一個(gè)反應(yīng)通常只能完成2個(gè)片段的拼接。

針對(duì)這一系的問(wèn)題，武漢云克隆在核酸酶及其反應(yīng)體系上經(jīng)過(guò)逾7年的研發(fā)，推出了一種高效多基因拼接技術(shù)以及配套的技術(shù)體系，打破了傳統(tǒng)拼接技術(shù)的種種限制，主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：1、在同一個(gè)反應(yīng)體系中能同時(shí)完成3-5個(gè)基因片段拼接；2、對(duì)于拼接片段適用性廣，200-8000bp的片段都能用于拼接；3、拼接成功率高，普通兩兩拼接≥85%；4、不會(huì)帶入任何的外源序列。該技術(shù)主要特征在于（如圖所示），在反應(yīng)體系中一種核酸酶能非特異的識(shí)別DNA 5’-3’端的14-20bp的堿基，并沿5’-3’進(jìn)行消化，使DNA形成粘性末端，在退火的情況下粘性末端通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)鏈接形成一個(gè)整體。

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