各種組蛋白的體外檢測及提取技術(shù)
組蛋白(histones)是真核細(xì)胞核中染色質(zhì)中的強(qiáng)堿性蛋白質(zhì),是真核生物染色體的基本結(jié)構(gòu)蛋白。組蛋白將DNA進(jìn)行壓縮并與DNA一起形成核小體,如果沒有組蛋白,染色體DNA解開,形成散亂的很長的DNA鏈。
組蛋白的研究具有非常重要的意義。體內(nèi)組蛋白的異常會(huì)導(dǎo)致許多疾病,如慢性腎病等。同時(shí)有關(guān)組蛋白的修飾與機(jī)體免疫調(diào)節(jié),自身免疫病,腫瘤,神經(jīng)系統(tǒng)疾病,以及內(nèi)分泌疾病都非常相關(guān)。
組蛋白有六種類型:H1、H2A、H2B、H3、H4及古細(xì)菌組蛋白,它們富含帶正電荷的堿性氨基酸,而DNA中主要帶負(fù)電荷,二者相互作用,使DNA纏繞在組蛋白上,形成DNA-組蛋白復(fù)合物。H2A,H2B,H3和H4被稱為核心組蛋白,而組蛋白H1和H5是已知作為連接體的組蛋白。核心組蛋白均以二聚體形式存在。
H2A ,H2B,H3,H4均是一種非特異性的蛋白,在人,大小鼠三個(gè)物種中均相同,故The Cloud-Clone. Corp. 針對這四個(gè)主要的組蛋白研發(fā)了多物種試劑盒。
SEA282Mi ELISA Kit for Histone H2A (H2A)
SEA356Mi ELISA Kit for Histone H2B (H2B)
SEA285Mi ELISA Kit for Histone H3 (H3)
SEA289Mi ELISA Kit for Histone H4 (H4)
由于組蛋白是一種核蛋白,故在做相關(guān)實(shí)驗(yàn)如Elisa時(shí),樣本的處理也格外重要,不合適的樣本處理會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大影響。
對于組蛋白的提取可以提供如下配方,給研究者參考:
50 mM Tris (pH 7.4), 300 mM NaCl, 10% (w/v)glycerol, 3 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 20 mM -glycerophosphate, 25 mM NaF, 1% TritonX-100, 25 ug/mL Leupeptin, 25 ug/mL Pepstatin, and 3 ug/mL Aprotinin.
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