類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一個(gè)累及周圍關(guān)節(jié)為主的多系統(tǒng)性、炎癥性的自身免疫疾病，其特征性癥狀為對稱性、周圍性多個(gè)關(guān)節(jié)慢性炎癥病變，其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，迄今尚未完全闡明。

佐劑性關(guān)節(jié)炎模型是Freund于20世紀(jì)50年代創(chuàng)立的，又稱弗氏佐劑關(guān)節(jié)炎，弗氏佐劑分為完全佐劑(CFA)和不完全佐劑(IFA)。其機(jī)制是結(jié)核桿菌致關(guān)節(jié)炎抗原為65 kD熱休克蛋白(HSP)，RA病人軟骨內(nèi)具有與65kD HSP相似的蛋白多糖橋聯(lián)蛋白抗原成分，F(xiàn)CA注入激活T細(xì)胞，激活T細(xì)胞參與RA發(fā)病機(jī)制。此模型存在明顯的細(xì)胞免疫異常，為一種典型的免疫性炎癥模型，并且制作方法簡單，可廣泛應(yīng)用于多種動物，便于研究者選擇應(yīng)用。研究表明，在 RA 發(fā)病過程中，促炎細(xì)胞因子(IL-1，TNF-α，IFN-γ，IL-2 等) 和抗炎細(xì)胞因子 (IL-4，IL-10，TGF-β 等) 的不平衡占有重要地位，其中 IL-1 和 TNF-α 參與多種病理學(xué)過程，在發(fā)病機(jī)制中尤為重要。

1.實(shí)驗(yàn)動物

SPF級Wistar大鼠，雄性，體重為180g-220g。隨機(jī)分為對照組10只和模型組20只。

2.主要試劑

完全弗氏佐劑(CFA)（Sigma公司）

3.建模方法

抓取大鼠，于右后足皮內(nèi)注射 0.1 mL CFA 致炎，從而建立大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型；對照組右后足趾皮下注射0.01moI/L 冰醋酸 0. 1mI，以排除 CFA 中溶劑的致敏效應(yīng)。

模型的評價(jià)

4.1體質(zhì)重測定：分別于0d、7d、14d、21d、28d記錄大鼠的體重，比較模型組大鼠體重和對照組大鼠的體重變化；

4.2免疫評價(jià)：

稱量大鼠體重，處死大鼠，取出脾和胸腺，生理鹽水漂洗后用紗布吸干表面水分，分別于電子天平上稱質(zhì)量(濕質(zhì)量)，并計(jì)算臟器指數(shù)。

臟器指數(shù) = 器官濕質(zhì)量(mg) /大鼠體重(g)

4.3足跖腫脹值（mm）測定：

足趾腫脹度是佐劑性關(guān)節(jié)炎測量的一個(gè)重要指標(biāo)。0d時(shí)在大鼠足跖同一地方做標(biāo)記，用電子游標(biāo)卡尺以標(biāo)記為準(zhǔn)，測定大鼠足跖厚度，以后每隔7d(7、14、21d和28d時(shí))再分別測量，進(jìn)行自身左右側(cè)足跖對照和組別間對照。

4.4關(guān)節(jié)炎指數(shù)(arthritisindex index，AI)評價(jià)：

采用關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分評價(jià)其關(guān)節(jié)炎癥程度。除了誘導(dǎo)部位右后足以外，根據(jù)其余3只未注射的肢體病變程度和趾間是否發(fā)炎對每一足爪分別進(jìn)行打分，以0～4分記錄，累積得分即為每只大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)。

0分：無紅斑和腫脹的證據(jù)；

1分：紅斑和輕度腫脹局限于足中段或踝關(guān)節(jié)；

2分：紅斑和輕度腫脹從踝關(guān)節(jié)蔓延至足中段；

3分：紅斑和輕度腫脹從踝關(guān)節(jié)蔓延至關(guān)節(jié)；

4分：紅斑和重度腫脹包括了踝、足和趾；

4.5病理組織學(xué)觀察：

處死大鼠，留取剔除軟組織的后肢踝關(guān)節(jié)，固定、脫鈣、包埋、石蠟切片后行HE染色作組織學(xué)觀察。正常大鼠踝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)正常，無炎性細(xì)胞浸潤，滑膜細(xì)胞排列整齊，軟骨表面光滑，關(guān)節(jié)腔內(nèi)未見滲出液；模型組大鼠關(guān)節(jié)破壞明顯，周圍大量中性粒細(xì)胞浸潤，滑膜增生肥厚，纖維組織增生，軟骨及骨骼損傷。

4.6大鼠血清中 炎癥因子含量測定：

大鼠3%戊巴比妥鈉麻醉后，于下腔靜脈取血1ml，靜止30min， 4℃離心機(jī)4000r/min離心30min，分離出上層血清，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。使用ELISA試劑盒檢測TNFα、IL-1β等細(xì)胞因子的含量。

4.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

　應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x ±ｓ）表示，采用ｔ檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05表示有顯著性差異，P<0.01表示有極顯著性差異。