大腦中動(dòng)脈阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前最常用的局灶性腦缺血模型,MCAO 模型先阻斷頸外動(dòng)脈（ECA）及其分支，且阻斷翼腭動(dòng)脈（PPA），以切斷顱外來源的側(cè)副循環(huán)血流。從ECA插入尼龍線，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）到大腦前動(dòng)脈（ACA），機(jī)械性阻斷大腦中動(dòng)脈（MCA）發(fā)出處的血供來建立大腦中動(dòng)脈缺血模型。此模型可在無(wú)麻醉狀態(tài)下拔出尼龍線，恢復(fù)血流，實(shí)現(xiàn)再灌注。 線栓法具有不開顱、效果肯定、可準(zhǔn)確控制缺血及再灌注時(shí)間的優(yōu)點(diǎn)，用于研究神經(jīng)元對(duì)缺血的敏感性、耐受性，藥物療效觀察以及再灌注損害和治療時(shí)間窗較為理想，同時(shí)也具有對(duì)全身影響小、動(dòng)物存活時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn)，適于慢性腦損傷的研究?？刂坪靡鬃円蛩?，可避免實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定性。

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)Wistar大鼠，健康，雄性，體重為250g-300g。

2.實(shí)驗(yàn)分組

    實(shí)驗(yàn)分六組：正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組，每組15只動(dòng)物。

3.主要試劑

2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride（sigma）

4.建模方法

1.15%水合氯醛麻醉大鼠，頸部備皮，消毒，插入肛溫探頭，保持體溫在37±0.5℃。

2.頸部正中切口，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈，頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈。使用6-0絲線在距離頸總動(dòng)脈分叉4mm處結(jié)扎頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，在頸外動(dòng)脈穿入另一根6-0絲線，在靠近頸總動(dòng)脈分叉處打一個(gè)活結(jié)。

3.使用動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈。在距離頸總動(dòng)脈分叉處3mm處的頸外動(dòng)脈上剪一個(gè)小口，將一根頭端處理過的0.33mm直徑的尼龍線從小口中插入，進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，并向內(nèi)插入大腦中動(dòng)脈，尼龍線的插入深度距離頸總動(dòng)脈分叉處約16±1mm。

4.缺血后90min拔掉線栓，用6-0絲線結(jié)扎外動(dòng)脈近心端，用3-0絲線縫合頸部傷口，活力碘消毒傷口，將大鼠放在加熱墊上，待清醒后放入恒溫?fù)狃B(yǎng)箱飼養(yǎng)。

5.術(shù)后24h，對(duì)小鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，然后腹腔注射15%水合氯醛麻醉大鼠，取大腦進(jìn)行TTC染色和病理染色

  5模型的評(píng)價(jià)

1.神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分 

參考Longa及Bederson的5分制法在動(dòng)物麻醉清醒后24h進(jìn)行評(píng)分，分值越高,說明動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重。

0分:無(wú)神經(jīng)損傷癥狀

1分:不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪

2分:向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈

3分:向?qū)?cè)傾倒

4分:不能自發(fā)行走,意識(shí)喪失

2.TTC染色

麻醉大鼠后，取大鼠腦組織，放入-20℃冰箱冷凍30min。用PBS配置1% TTC（W/V），37℃水浴至TTC溶解，將凍好的腦組織切片，置于10ml TTC溶液中，37℃恒溫孵育10min。不時(shí)翻動(dòng)腦片，使組織均勻染色。正常腦組織染色后呈鮮紅色，而梗死區(qū)呈蒼白色。

3.病理學(xué)評(píng)價(jià)

取腦后用4%多聚甲醛溶液固定，蔗糖溶液脫水后，經(jīng)OCT包埋做冰凍切片，切片10um，做尼氏染色，可做梗死面積的評(píng)價(jià)。

尼氏體（Nissl body）：是胞質(zhì)內(nèi)的一種嗜堿性物質(zhì)，廣泛見于各種神經(jīng)元，但其形狀大小和數(shù)量則各有差異。在生理情況下,尼氏體大而數(shù)量多,反映神經(jīng)細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的功能較強(qiáng),在神經(jīng)元受損時(shí),尼氏體的數(shù)量可減少甚至消失。

圖1. TTC染色圖（白色表示梗死組織，紅色表示正常組織）