大鼠腎纖維化模型
腎積水(hydronephrosis)是指尿液從腎盂排出受阻,蓄積后腎內(nèi)壓力增高,腎盂腎盞擴(kuò)張,腎實(shí)質(zhì)萎縮,導(dǎo)致腎功能減退。梗阻性腎病其主要的病理生理改變是腎積水、腎盂及腎小管壓力升高、腎間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、腎間質(zhì)內(nèi)成纖維細(xì)胞增生、腎間質(zhì)膠原蛋白聚集、腎間質(zhì)增寬、腎小管萎縮,最終導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化和腎單位減少,引起腎功能衰竭。
單側(cè)輸尿管梗阻是比較成熟的腎間質(zhì)纖維化模型,結(jié)扎2周就可有成纖維細(xì)胞的增生和間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)的生成。但是由于輸尿管的結(jié)扎使患側(cè)腎盂中的尿液不能外排,加上對(duì)側(cè)腎臟的代償作用,所以一般情況模型組血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白僅明顯高于正常組,但還處于正常范圍之內(nèi),同時(shí)對(duì)側(cè)腎一般也無(wú)明顯改變,而患側(cè)腎臟組織中大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、腎小管和間質(zhì)的結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞以及腎間質(zhì)纖維化,最后腎間質(zhì)呈現(xiàn)廣泛的纖維化,而腎小球幾乎沒(méi)有病變。因此單側(cè)輸尿管梗阻模型在研究腎間質(zhì)纖維化方面使研究的靶點(diǎn)明確,有利于其病變機(jī)理及抗間質(zhì)纖維化治療的研究。
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
SPF級(jí)Wistar大鼠,健康,雄性,體重為180g~200g
2.實(shí)驗(yàn)分組
實(shí)驗(yàn)分六組:正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組,每組15只動(dòng)物。
3.實(shí)驗(yàn)周期
7d,14d,21d,28d
4.建模方法
1術(shù)前一晚禁食,自由飲水。
2稱(chēng)量大鼠,腹腔注射水合氯醛(15%)350mg/kg麻醉,剃毛固定后用碘酒及酒精擦拭手術(shù)區(qū)域。
3在上腹中線偏左約3-4mm剪開(kāi)腹壁,手術(shù)組分離出左腎輸尿管。
4 在靠近腎下極處結(jié)扎并分離輸尿管,然后雙結(jié)扎,在2個(gè)結(jié)扎中間剪斷輸尿管,逐層縫合肌層及腹壁,酒精清潔縫合處。待小鼠清醒后,將其放回潔凈籠具后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng),定期觀察大鼠狀態(tài)及死亡情況并做好記錄。
5置于加熱墊至其蘇醒。假手術(shù)組不結(jié)扎輸尿管,其余步驟相同。
6術(shù)后三天連續(xù)注射青霉素20萬(wàn)單位/天防止感染。
5模型的評(píng)價(jià)
5.1 蛋白尿含量、尿NAG活性測(cè)定 模型組術(shù)后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常組和假手術(shù)組明顯上升。
5.2 血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量測(cè)定 手術(shù)4周后,模型組血清Scr和BUN含量相對(duì)于正常組和假手術(shù)組有穩(wěn)定的升高。
5.3 形態(tài)學(xué)觀察:術(shù)后取左腎于4%多聚甲醛固定,依次脫水、透明、石蠟包埋、切片。做HE染色及Masson染色,光鏡觀察腎小球、腎小管-間質(zhì)的病理變化及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況。可見(jiàn)模型組小鼠的腎間質(zhì)出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管上皮細(xì)胞萎縮、刷狀緣消失、腎小管管腔擴(kuò)張呈囊狀,管腔塌陷,間質(zhì)明顯增寬,間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),伴有較多的成纖維細(xì)胞增生。并隨時(shí)間的延長(zhǎng)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)加重,小管上皮細(xì)胞扁平、脫落,腎小管萎縮、擴(kuò)張加重,甚至塌陷、消失,膠原纖維增生,間質(zhì)纖維化加重 。
6 注意事項(xiàng)
1 分離輸尿管時(shí)注意不要損傷腎臟
2 注意清理傷口,防止感染。
3.取下腎臟后要?jiǎng)冸x腎表面的結(jié)締組織薄膜。
圖1 腎臟大體圖(左邊為未結(jié)扎側(cè)腎,右邊為輸尿管結(jié)扎側(cè)腎,腎盂積水,腎臟體積明顯擴(kuò)大,皮質(zhì)變?。?/p>