潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種慢性非特異性炎癥，其原因不明，是非特異性腸道炎癥，其病變部位好發(fā)于直腸和結(jié)腸，多表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、黏液膿血便、 里急后重，具有易反復(fù)、病程遷延、不易治愈的特點(diǎn)?？赡芘c細(xì)菌感染、食物或異物損傷、長期飼喂精飼料、濫用抗生素類藥物及精神障礙等有一定的關(guān)系。在我國，UC的發(fā)病率有逐年增高的趨勢，逐漸引起了人們的重視。到目前為止?jié)冃越Y(jié)腸炎的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，研究表明腸黏膜出現(xiàn)慢性炎癥可能與基因、環(huán)境、微生物及免疫功能的失調(diào)等多種因素相互作用有關(guān)。

    1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級SD大鼠，雄性，周齡為4w~6w，體重為180g~220g。

2.實(shí)驗(yàn)分組：

    實(shí)驗(yàn)分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組，每組15只動(dòng)物。

3.實(shí)驗(yàn)周期

    7d

    4.建模方法

1. 大鼠術(shù)前12 h禁食，自由飲水。

2.  3%戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔麻醉(20mg／kg)大鼠，大鼠取頭低尾高體位，將聚乙烯導(dǎo)管經(jīng)肛門緩慢插入結(jié)腸8cm并經(jīng)其注入10％乙酸1 mL，捏緊大鼠肛門倒提30 s后，注入生理鹽水3mL沖洗2次，正常組注入等量生理鹽水對照，造模結(jié)束后讓大鼠平躺，自然清醒，常規(guī)飼養(yǎng)。

3. 7d后大鼠3%戊巴比妥鈉麻醉后，于下腔靜脈取血1ml，室溫靜止2h， 4℃離心機(jī)3000r/min離心10min，分離出上層血清，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?nbsp;處死大鼠，取出肛門至盲腸末端的整個(gè)結(jié)腸和直腸段，沿腸系膜縱軸剪開，預(yù)冷生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干，肉眼觀察各組大鼠結(jié)腸的大體改變，測量結(jié)腸長度及記錄濕重。剪取病變最嚴(yán)重的結(jié)腸1 cm，4％多聚甲醛固定，石蠟包埋切片(厚4um)，HE染色。觀察病理改變，其余結(jié)腸置于-80℃冰箱備用。

  5.模型評價(jià)

1. 疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評分：

造模后觀察大鼠每日腹瀉、血便及體重變化情況，并記錄大鼠的一般情況。造模后，模型組大鼠體重明顯下降，出現(xiàn)身體蜷縮，毛發(fā)豎立，行動(dòng)遲緩，食欲減退，大便稀溏的癥狀。DAI評分：造模后7d，綜合大鼠體重下降百分率（體重不變?yōu)?，1～5為1分，6～10為2分，11～15為3分，大于15為4分），大便黏稠度（正常為0，松散大便為2分，腹瀉為4分)和大便出血(正常0分，隱血陽性為2分，顯性出血為4分）進(jìn)行積分。DAI綜合評分介于0～4分之間，0分代表正常，4分代表炎癥最大活動(dòng)度。

2. 結(jié)腸長度和結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)(CMDI)：結(jié)腸長度反映慢性炎癥和損傷修復(fù)的間接指標(biāo)，測量肛門至盲腸根部的長度為結(jié)腸長度，單位cm。CMDI為大體標(biāo)本肉眼損傷評價(jià)指標(biāo)，評分標(biāo)準(zhǔn)：無損傷為0；輕度充血，水腫，表面光滑，無糜爛或潰瘍?yōu)?分；充血水腫，黏膜粗糙呈顆粒狀，有糜爛或腸粘連為2分；高度充血水腫，黏膜表面有壞死及潰瘍形成，潰瘍最大縱徑小于1．0 cm，腸壁增厚或表面有壞死及炎癥為3分；在3分基礎(chǔ)上潰瘍最大縱徑大于1．0 cm或全腸壁壞死為4分

3. 組織學(xué)損傷評分

取病變最明顯處結(jié)腸段1 cm，4％多聚甲醛溶液固定，然后將組織常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片（厚度為4μm），HE染色。經(jīng)HE染色觀察，模型組病變結(jié)腸水腫，腸壁明顯增厚。黏膜面有彌漫性出血點(diǎn)、紅斑和潰瘍。鏡下可見結(jié)腸黏膜糜爛、潰瘍、隱窩膿腫、杯狀細(xì)胞消失，固有層有中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤。正常組大鼠結(jié)腸黏膜完整，絨毛排列整齊，未見壞死、脫落。

表1 DAI評分表，DAI>0.5就代表疾病發(fā)生

表2 CMDI指數(shù)表，模型組CMDI指數(shù)低于對照組

圖1 結(jié)腸大體圖 模型組結(jié)腸的長度短于正常組，結(jié)腸縮短變寬、水腫增厚、充血出血及潰瘍