刀豆蛋白A(Con A)是一種被廣泛應(yīng)用可活化 T 細胞的有絲分裂原，依賴于輔助性T淋巴細胞(Th)及巨噬細胞發(fā)揮效應(yīng)，ConA活化T淋巴細胞，刺激Th細胞及巨噬細胞產(chǎn)生TNF -α和IFN Y等細胞因子。TNF -α可直接損傷肝細胞，導致肝細胞凋亡。Con A誘導的小鼠肝損傷實驗動物模型， 其病理特點主要是通過活化 T 淋巴細胞而致免疫性肝損傷。 Con A 靜脈注射小鼠體內(nèi)后，大部分在肝臟內(nèi)聚集，表明肝臟是Con A 體內(nèi)誘導毒性的靶器官。在病毒性肝炎的炎癥發(fā)生過程中，淋巴細胞介導的細胞毒作用是導致病毒感染肝實質(zhì)細胞溶解的主要免疫機理，而淋巴細胞與抗原遞呈細胞及產(chǎn)生抗原的靶細胞間的粘附，是免疫反應(yīng)過程所必需的重要步驟.

1.實驗動物

SPF級Balb/C小鼠，雄性，周齡為8w-10w，體重為30g-35g。

2.實驗分組

實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組，每組15只動物。

3.主要試劑

刀豆蛋白A

4.實驗周期

    6h

5.建模方法

ConA誘導小鼠肝損傷模型的建立：ConA溶于0.01 mol/L PBS，配成濃度為4mg/ml，以20mg/kg的劑量自小鼠尾靜脈注射1次，在6 h處死小鼠，同時設(shè)立PBS尾靜脈注射的PBS對照組。所有小鼠標準飼料飼養(yǎng)， 自由攝食及飲水。

6.模型的評價

1. ConA誘導免疫性肝損傷小鼠ALT、AST及MPO的影響：

術(shù)后6h，摘眼球取血，室溫靜止2h， 4℃離心機3000r/min離心10min，分離出上層血清，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。與正常組比較，模型組血清ALT、AST及MPO均明顯升高。

2. ConA誘導免疫性肝損傷小鼠肝臟組織學的影響

取一肝葉，以4%多聚甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，觀察病理學改變。正常組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列。模型組肝細胞索排列紊亂，肝竇淤血較普遍，肝小葉內(nèi)大多數(shù)肝細胞腫脹，肝組織可見匯管區(qū)纖維間隔形成，可見明顯的點狀壞死和灶狀壞死，壞死灶內(nèi)可見大量中性粒細胞，淋巴細胞和單核細胞浸潤，廣泛肝細胞嗜酸性變、空泡變、脂肪變。

   3. 細胞因子的檢測

肝臟損傷后，血清中TNFα、IFNγ、IL-2、IL-6、ICAM1等細胞因子的表達顯著升高，可以用ELISA 法檢測。

圖1 正常小鼠。肝細胞以中央靜脈為中心呈放射性排列(HE染色)

圖2 刀豆蛋白肝損傷小鼠。中央靜脈周圍肝細胞空泡樣變性，炎癥細胞浸潤(HE染色)