卵巢是卵子發(fā)育和激素產(chǎn)生的器官，其受到下丘腦和垂體促性腺激素的雙重調(diào)控(卵泡雌激素FSH)和黃體生成素(LH)。LH是在下丘腦垂體促性腺激素釋放激素(GnRH)的作用下以脈沖的方式分泌，在正反饋?zhàn)饔孟抡T發(fā)排卵所需的LH峰。在卵巢，F(xiàn)SH受抑制素的雙重負(fù)反饋調(diào)節(jié)，并受到性激素尤其是雌激素、孕激素的負(fù)反饋調(diào)節(jié)。雌激素在調(diào)節(jié)骨代謝及維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性方面有著重要的作用，雌激素水平低下被認(rèn)為是導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的主要原因。雌性大鼠雙側(cè)卵巢摘除是一個(gè)較成熟的動(dòng)物模型，可以成功建立模擬雌激素缺乏而導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型。這也為研究雌激素缺乏對(duì)人體其他系統(tǒng)的損害奠定了基礎(chǔ)。雌激素是體內(nèi)重要的激素，它對(duì)骨代謝有著重要的作用。在對(duì)小鼠進(jìn)行去勢(shì)手術(shù)后，機(jī)體處于一種低雌激素的微環(huán)境，骨轉(zhuǎn)換過程加速，骨代謝加強(qiáng)，成骨細(xì)胞量降低，破骨細(xì)胞活躍，從而導(dǎo)致機(jī)體骨量丟失以及正常生理結(jié)構(gòu)的破換，容易導(dǎo)致骨質(zhì)疏。研究顯示雌激素缺乏后，小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞成骨能力顯著降低，這與骨質(zhì)疏松發(fā)生有關(guān)；而且雌激素缺乏后，會(huì)加重牙周炎的程度，這與雌激素缺乏后降低了牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖與成骨能力有關(guān)。

許多已知的骨代謝相關(guān)因子都受到雌激素的調(diào)控。在成骨細(xì)胞，雌激素能夠促進(jìn)代謝生長因子IGF-I 的合成與分泌，同時(shí)抑制骨吸收相關(guān)因子，如白介素-1（IL-1）及白介素-6（IL-6）、前列腺素、腫瘤壞死因子(TNF)等。雌激素也可以促進(jìn)骨保護(hù)素（OPG）的合成與分泌，而這種激素在抑制破骨細(xì)胞的功能方面有著重要的作用。多方證據(jù)表明，在卵巢切除術(shù)后或絕經(jīng)后，由于骨小梁的快速缺失而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    SPF級(jí)Balb/c小鼠，健康，雌性未孕，4~6W，體重為18g~20g.

    2.實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)分六組：正常對(duì)照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組，每組15只動(dòng)物。

3.實(shí)驗(yàn)周期

12W

4.建模方法

1. 小鼠3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔麻醉后仰臥，腹部脫毛。

2. 在無菌條件下于腹股溝水平沿腹中線剪開皮膚及肌層，暴露腹腔。

3. 分離子宮并摘除卵巢，清理傷口后分兩層縫合皮膚及基層，待小鼠清醒后，將其放回潔凈籠具后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，定期觀察小鼠狀態(tài)及死亡情況并做好記錄。

4. 術(shù)后3天，每只小鼠每天注射4萬單位青霉素，防止感染。

5. 對(duì)照組僅摘除卵巢周圍約1 g脂肪，而保留卵巢，其余處理相同。

6. 12W取材，X線測(cè)量各組小鼠骨密度（bone mineraldensity ，BMD），再腹腔注射麻醉，摘眼球取血，室溫靜止2h，4℃離心機(jī)3000r/min離心10min，分離出上層血清，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。取小鼠脛骨?biāo)本用于病理學(xué)檢測(cè)。

  5模型的評(píng)價(jià)

1．卵巢去勢(shì)后小鼠體重、雌二醇及骨密度變化

去勢(shì)組大鼠體重增長迅速，活動(dòng)能力下降，毛色缺乏光澤而略灰暗，而對(duì)照組小鼠體重增加緩慢，毛色光亮，活動(dòng)正常。去勢(shì)組雌二醇水平及股骨 BMD 顯著下降。

2 . 骨形態(tài)學(xué)染色

取各組小鼠脛骨標(biāo)本，置入 10%中性甲醛緩沖固定液中（pH=7.2-7.4，4°C）固定 24-48h，再經(jīng) 10%EDTA-2 Na 緩沖液（pH=7.4，4°C）脫鈣，隔5-7d 更換脫鈣液；脫鈣完全后，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，縱向石蠟包埋，5um 連續(xù)切片，常規(guī) HE 染色。

對(duì)照脛骨骨小梁密集，相互交織成網(wǎng)狀；模型組骨小梁數(shù)目明顯減少，骨小梁變薄，呈斷裂狀。

3 細(xì)胞因子的檢測(cè)

有研究發(fā)現(xiàn)，雌激素的缺乏將導(dǎo)致機(jī)體自發(fā)的啟動(dòng)應(yīng)激反應(yīng)。去勢(shì)后血清中IL-6 、IL-8 、IL-1β、TNF-α 的表達(dá)量增加，可以用ELISA 法檢測(cè)。

圖1小鼠卵巢去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥模型手術(shù)大體操作圖