大腦中動脈阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前最常用的局灶性腦缺血模型,MCAO 模型先阻斷頸外動脈（ECA）及其分支，且阻斷翼腭動脈（PPA），以切斷顱外來源的側(cè)副循環(huán)血流。從ECA插入尼龍線，經(jīng)頸內(nèi)動脈（ICA）到大腦前動脈（ACA），機械性阻斷大腦中動脈（MCA）發(fā)出處的血供來建立大腦中動脈缺血模型。此模型可在無麻醉狀態(tài)下拔出尼龍線，恢復(fù)血流，實現(xiàn)再灌注。 線栓法具有不開顱、效果肯定、可準確控制缺血及再灌注時間的優(yōu)點，用于研究神經(jīng)元對缺血的敏感性、耐受性，藥物療效觀察以及再灌注損害和治療時間窗較為理想，同時也具有對全身影響小、動物存活時間長的特點，適于慢性腦損傷的研究。控制好易變因素，可避免實驗結(jié)果的不穩(wěn)定性。

1.實驗動物

 SPF級BablC小鼠，健康，雄性，體重為25g-30g

    2.實驗分組

    實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組，每組15只動物。

3.主要試劑

2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride（sigma）

4.建模方法

1. 3%戊巴比妥鈉麻醉小鼠，頸部備皮，消毒，插入肛溫探頭，保持體溫在37±0.5℃。

2. 頸部正中切口，暴露右側(cè)頸總動脈，頸內(nèi)動脈和頸外動脈。使用7-0絲線在距離頸總動脈分叉2mm處結(jié)扎頸外動脈遠心端，在頸外動脈穿入另一根7-0絲線，在靠近頸總動脈分叉處打一個活結(jié)。

3. 使用動脈夾夾閉頸總動脈。在距離頸總動脈分叉處1.5mm處的頸外動脈上剪一個小口，將一根頭端處理過的0.18mm直徑的尼龍線從小口中插入，進入頸內(nèi)動脈，并向內(nèi)插入大腦中動脈，尼龍線的插入深度距離頸總動脈分叉處約9±1mm。

4. 缺血后60min拔掉線栓，用7-0絲線結(jié)扎外動脈近心端，用5-0絲線縫合頸部傷口，活力碘消毒傷口，將小鼠放在加熱墊上，待清醒后放入恒溫撫養(yǎng)箱飼養(yǎng)。

5. 術(shù)后24h，對小鼠進行神經(jīng)功能評分，然后麻醉小鼠，取大腦進行TTC染色和病理染色。

  5模型的評價

1.神經(jīng)功能缺失體征評分 

參考Longa及Bederson的5分制法在動物麻醉清醒后24h進行評分，分值越高,說明動物行為障礙越嚴重。

0分:無神經(jīng)損傷癥狀

1分:不能完全伸展對側(cè)前爪

2分:向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈

3分:向?qū)?cè)傾倒

4分:不能自發(fā)行走,意識喪失

2.TTC染色

麻醉小鼠后，取小鼠腦組織，放入-20℃冰箱冷凍30min。用PBS配置1% TTC（W/V），37℃水浴至TTC溶解，將凍好的腦組織切片，置于10ml TTC溶液中，37℃恒溫孵育10min。不時翻動腦片，使組織均勻染色。正常腦組織染色后呈鮮紅色，而梗死區(qū)呈蒼白色。

3.病理學(xué)評價

取腦后用4%多聚甲醛溶液固定，蔗糖溶液脫水后，經(jīng)OCT包埋做冰凍切片，切片10um，做尼氏染色，可做梗死面積的評價。

尼氏體（Nissl body）：是胞質(zhì)內(nèi)的一種嗜堿性物質(zhì)，廣泛見于各種神經(jīng)元，但其形狀大小和數(shù)量則各有差異。在生理情況下,尼氏體大而數(shù)量多,反映神經(jīng)細胞合成蛋白質(zhì)的功能較強,在神經(jīng)元受損時,尼氏體的數(shù)量可減少甚至消失。