缺血再灌注損傷(IRI)是器官移植、休克、動(dòng)脈搭橋術(shù)后等普遍存在的問題。腎臟是發(fā)生IRI極為常見的器官之一，尤其腎移植，不可避免的要經(jīng)歷一定程度的IRI,腎臟缺血再灌損傷是急性腎衰的常見原因。對(duì)麻醉動(dòng)物的腎動(dòng)脈進(jìn)行阻斷和再通后，可引起腎臟缺血再灌注損傷。在缺血再灌注過程中，鈣超載、線粒體能量合成障礙、氧自由基的增多等因素導(dǎo)致腎小管內(nèi)皮細(xì)胞脫落，腎臟組織結(jié)構(gòu)的破壞進(jìn)而使腎臟功能發(fā)生障礙。

 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

   SPF級(jí)Balb/C小鼠，雄性，周齡為4w~6w，體重為20g~22g。

 2.實(shí)驗(yàn)分組：

實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組、模型組、陽性藥組、受試藥組，每組15只動(dòng)物。

 3. 模型周期

    24h、72h

  4.建模方法

1.  選取20-22g左右小鼠，術(shù)前禁食12h，自由飲水。

2.  3％戊巴比妥鈉(80mg／kg)腹腔注射麻醉,小鼠背部去毛，消毒備皮。 

3.  在背部脊椎旁12.5px、肋骨下緣12.5px處剪開皮膚及肌肉，可見到腎臟, 小心分離出兩側(cè)腎臟的腎動(dòng)脈，迅速用動(dòng)脈夾夾閉兩側(cè)腎動(dòng)脈。 

4.  缺血45min后松開動(dòng)脈夾，恢復(fù)血流，觀察腎臟恢復(fù)情況。 

5. 分兩層縫合開口,待小鼠清醒后，將其放回潔凈籠具后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，定期觀察小鼠狀態(tài)及死亡情況并做好記錄。

6.  對(duì)照組不做缺血處理，其他操作相同。

7.  分別取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六個(gè)時(shí)間點(diǎn)取材。麻醉小鼠，摘眼球取血，室溫靜置2h后于4℃3000r離心10分鐘提取血清，放入-80冰箱凍存。同時(shí)取左腎組織留作病理標(biāo)本，右腎組織分生標(biāo)本。

5.模型的評(píng)價(jià)

1 血清生化指標(biāo)檢測： 

取各時(shí)間點(diǎn)（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，檢測血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,評(píng)估腎功能。

2 腎系數(shù)檢測

 摘取雙側(cè)腎臟后，生理鹽水沖洗，稱重計(jì)算腎系數(shù)。

腎系數(shù)=雙側(cè)腎重（mg）/體重（g）

3 病理組織學(xué)檢測：

4％多聚甲醛溶液固定48h。常規(guī)組織脫水、透明、浸蠟 、包埋。石蠟切片進(jìn)行HE染色和PAS染色。

對(duì)照組小鼠腎小球、 腎小管及腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)基本正常。在 模型組組， 隨著再灌注時(shí)間的延長呈現(xiàn)不同程度的腎臟病理改變， 可見腎小管上皮細(xì)胞渾濁腫脹，出現(xiàn)水樣或空泡變性，刷狀緣消失，部分腎小管上皮細(xì)胞凝固性壞死、脫落，腔內(nèi)可見管型，并可見間質(zhì)水腫，間質(zhì)內(nèi)灶性炎癥細(xì)胞浸潤，腎小球病變不明顯。每張切片×200 倍鏡下取外髓質(zhì)部 10 個(gè)視野，按 

0 = 正常，

1 = 輕微損傷(受損腎小管< 5%)，

2= 輕度損傷(受損腎小管 5 %～25 %)，

3 = 中度損傷(受損腎小管 25 %～75 %)，

4 = 重度損傷(受損腎小管> 75 %) 作半定量分析并計(jì)算其均值，作為腎小管壞死的評(píng)分指數(shù)

4 細(xì)胞因子的檢測

ELISA 法檢測血清 TNF-α、IL-6 含量, 模型組小鼠血清 TNF- α 和 IL- 6 含量在各時(shí)間點(diǎn)均顯著高于對(duì)照組，其中24h為最顯著。

6  注意事項(xiàng)

6.1 分離腎臟時(shí)不要損傷腎臟及其他器官

6.2  缺血要一次成功否則會(huì)造成缺血預(yù)處理而減輕損傷

6.3  缺血和應(yīng)可見腎臟先變白一段時(shí)間后變暗發(fā)紫

圖1 小鼠腎臟缺血再灌注手術(shù)操作圖（動(dòng)脈夾夾閉兩側(cè)腎動(dòng)脈，缺血45min后松開動(dòng)脈夾）