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昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)

昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)是四大表達(dá)系統(tǒng)(昆蟲細(xì)胞、細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng))之一。昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)原理是通過轉(zhuǎn)座作用將轉(zhuǎn)移載體中的表達(dá)組件定點(diǎn)轉(zhuǎn)座到能在大腸桿菌中增殖的桿狀病毒穿梭載體(Bacmid)上,通過抗性和藍(lán)白斑篩選到重組穿梭質(zhì)粒,提取穿梭質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后,得到的子代病毒即為重組病毒。將病毒上清浸染昆蟲細(xì)胞,獲得表達(dá)的重組蛋白。

桿狀病毒是一類閉合環(huán)狀雙鏈病毒,病毒粒子呈桿狀,以昆蟲為主要宿主。桿狀病毒還是一種出芽型分泌性病毒粒子,在感染細(xì)胞后能迅速在培養(yǎng)細(xì)胞中水平傳播而保持細(xì)胞在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)不裂解,從而最大限度地保持了外源蛋白的穩(wěn)定,昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)又被稱為昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)。昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)本身是一個(gè)蛋白裂解性系統(tǒng),在桿狀病毒感染昆蟲細(xì)胞的過程中,桿狀病毒可以編碼一些蛋白酶如木瓜蛋白酶等導(dǎo)致蛋白的降解。因此,收集細(xì)胞后,在裂解細(xì)胞之前要加入蛋白酶抑制劑防止蛋白的降解。

昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)屬于真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng),但又不同于酵母及哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng),酵母表達(dá)的蛋白易純化但也易降解,而哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的蛋白具有生物活性但成本高。細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)屬于原核表達(dá)系統(tǒng),操作簡(jiǎn)單、周期短收益大、表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定,但是表達(dá)基因的相對(duì)分子量有限,且不能對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行翻譯后加工修飾。而昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)具有很多優(yōu)點(diǎn):

(1)具有糖基化作用、乙?;饔谩⒘姿峄饔玫纫幌盗械鞍踪|(zhì)翻譯加工修飾系統(tǒng);

(2)正確的蛋白折疊、二硫鍵形成,使重組蛋白在結(jié)構(gòu)和功能上更接近天然蛋白,有利于表達(dá)產(chǎn)物形成天然的高級(jí)結(jié)構(gòu);

(3)具有對(duì)重組蛋白進(jìn)行定位的功能,如將核蛋白轉(zhuǎn)送到細(xì)胞核上,膜蛋白則定位在膜上,分泌蛋白則可分泌到細(xì)胞外等;

(4)昆蟲細(xì)胞懸浮生長(zhǎng),容易放大培養(yǎng),有利于大規(guī)模表達(dá)重組蛋白。高表達(dá)量,最高表達(dá)量可達(dá)昆蟲細(xì)胞蛋白總量的50%;

(5)可表達(dá)非常大的外源性基因(~200kD)而不至于影響本身的增殖;

(6)具有在同一個(gè)感染昆蟲細(xì)胞內(nèi)同時(shí)表達(dá)多個(gè)基因的能力;

(7)通用性廣,能用于表達(dá)來自病毒、細(xì)菌、真菌、植物和動(dòng)物幾乎所有的蛋白,并且能表達(dá)帶有內(nèi)含子的外源基因;

(8)對(duì)脊椎動(dòng)物是安全的,桿狀病毒屬于昆蟲病毒,有高度特異的宿主范圍,對(duì)脊椎動(dòng)物和植物均無致病性,而且經(jīng)重組后的病毒因失去多角體保護(hù)而使其在自然界的生存能力很弱,被認(rèn)為是安全的載體。

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