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?自2004年9月，《自然》首次刊登了美國科學家Andrew Z. Fire與Craig C. Mello等人撰寫的關(guān)于RNA干擾的成果文章，揭示了小RNA在生物生命活動中重要的調(diào)控作用開始，現(xiàn)在幾乎每天都會有文章對各種小RNA與機體發(fā)育等生命活動之間關(guān)系的進展進行報道。而精明的生物技術(shù)公司也正在以驚人的速度積極地將RNAi技術(shù)運用于藥物篩選研究。云克隆現(xiàn)已針對慢病毒與腺病毒表達系統(tǒng)展開了一系列服務(wù)項目，其中就有RNAi這一項。

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?RNAi (RNA interference) 即RNA干擾，是由雙鏈RNA（dsRNA）介導的、由特定酶參與的特異性基因沉默現(xiàn)象,它在轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平和翻譯水平上阻斷基因的表達。RNAi 廣泛存在于生物的各種生命活動中。

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?RNA干擾的實驗流程圖如下：

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?以人CDHE基因為例，我們通過工具網(wǎng)站及查閱文獻選取出三個RNAi的靶位點，將三個靶位點的shRNA骨架插入pLKO.1載體，得到重組質(zhì)粒：pLKO.1-shCDHE-1, pLKO.1-shCDHE-2, pLKO.1-shCDHE-3，測序驗證是否正確，得到驗證結(jié)果后，選擇正確的重組質(zhì)粒進行瞬時轉(zhuǎn)染。

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?那么通過哪些方面可以檢測RNA的干擾效率呢？

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mRNA水平我們選用RT-PCR（Real-time PCR）進行檢測，檢測結(jié)果如圖1所示：

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?由RT-PCT結(jié)果可見，在兩種細胞中sh-CDHE-2都能下調(diào)CDHE mRNA的水平，RNAi有效果。

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?蛋白質(zhì)水平我們可以用Western-blot、ELISA、免疫組化的方法進行檢測，檢測結(jié)果如圖2所示：

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?由WB結(jié)果可見，在293T細胞中sh-CDHE-1和2均有一定效果，能下調(diào)相關(guān)蛋白的表達，與RT-PCT結(jié)果一致。

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?由于使用RNAi技術(shù)可以特異性干涉特定基因的表達(長度超過三十的dsRNA會引起干擾素毒性)，所以該技術(shù)已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的治療領(lǐng)域。

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?云克隆正在進一步挖掘RNAi技術(shù)潛在的強大功能。目前除基因沉默外，云克隆還開展了基因過表達及基因敲除項目，三個項目齊頭并進，均取得了顯著的成效。

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