介紹：

免疫磁珠分選，是基于抗原抗體特異性識(shí)別的原理，使用高度特異性單克隆抗體偶聯(lián)的磁化微粒對(duì)目的細(xì)胞進(jìn)行特異性的磁性標(biāo)記。通過(guò)高強(qiáng)度、梯度磁場(chǎng)從而達(dá)到細(xì)胞磁性分離的目的。

可應(yīng)用范圍：

特定表型的細(xì)胞

特定細(xì)胞因子分泌細(xì)胞

轉(zhuǎn)染細(xì)胞

凋亡細(xì)胞

磁珠分選特點(diǎn)：

ü 磁珠分選后可獲得高純度（大于90%）、高得率的目的細(xì)胞。

ü 磁化微粒和分選柱對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性、無(wú)損傷，可生物降解。純化后細(xì)胞不影響活性和功能。

ü 除目的細(xì)胞外的其它細(xì)胞群均可回收利用。

ü 可實(shí)現(xiàn)10e5到10e11總細(xì)胞數(shù)的分選。

ü 與流式細(xì)胞儀兼容，不影響細(xì)胞光學(xué)特效、不影響熒光抗體染色。

分選策略：

陽(yáng)性分選：將目的細(xì)胞磁性標(biāo)記后，作為陽(yáng)性組分直接分選?；厥章矢撸m合富集低比例細(xì)胞。

去除分選（陰性分選）：將非目的細(xì)胞磁性標(biāo)記后，從總細(xì)胞中去除。即未磁性標(biāo)記的細(xì)胞為目的細(xì)胞。這種方式目的細(xì)胞不與抗體結(jié)合，適合于缺乏針對(duì)目的細(xì)胞的特異性抗體的情況（某些稀有標(biāo)志）。

去除分選+陽(yáng)性分選：先去除非目的細(xì)胞，再進(jìn)行陽(yáng)性分選。適用于非目的細(xì)胞也表達(dá)陽(yáng)選標(biāo)志的情況，可獲得高純度的非常稀有的細(xì)胞。

客戶實(shí)際案例展示

小鼠脾臟CD4+細(xì)胞的分選

1、分離小鼠脾臟淋巴細(xì)胞：

① 小鼠經(jīng)脫頸處死。浸入75%的乙醇中浸泡1-2min。轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)中，腹面朝上，剪開(kāi)小鼠左側(cè)下腹部皮膚，分離小鼠脾臟置入200目篩網(wǎng)上，滴加淋巴細(xì)胞分離液4-5ml/個(gè)脾臟，用注射器活塞輕輕研磨，使脾臟細(xì)胞充分透過(guò)篩網(wǎng)過(guò)濾至下方容器中。

② 將脾臟細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，最上層覆蓋2ml無(wú)血清1640 培養(yǎng)基，800g室溫離心30 min。

③ 吸出淋巴細(xì)胞層，加入10ml無(wú)血清1640 培養(yǎng)基洗滌，250g 室溫離心10min。棄去上清。

2、CD4+ 磁珠分選：

① Fc受體封閉：加入FACs buffer 稀釋的anti-CD16/CD32  antibody工作液， 4℃孵育30min。

② 200目篩網(wǎng)再次過(guò)濾。1000rpm 4℃離心10min。

③ 磁珠孵育：FACs buffer 稀釋磁珠及表面染色抗體，加入CD4+ beads工作液,4℃避光孵育30min。

④ 1000rpm 4℃離心10min。珠分選柱安放在分選器中，加3ml FACs buffer入加樣池內(nèi)潤(rùn)洗柱子。待分選柱中液體自然流干后，將離心后細(xì)胞輕柔加入分選柱加樣池中，等待樣品完全自然流出。

⑤ 洗滌分選柱。

⑥ 將分選柱移出分選器磁場(chǎng)，擱置在15ml離心管上，加5ml 原代細(xì)胞完全培養(yǎng)基入加樣池內(nèi)，迅速一次性打出所有液體。

⑦ 離心洗滌。

3、分選后流式染色鑒定：

分別取分選前總細(xì)胞、分選后細(xì)胞，CD4-FITC染色，流式檢測(cè)CD4+細(xì)胞數(shù)的比例。結(jié)果見(jiàn)下

圖：