1. 酶標(biāo)板包被抗體流程：

1.1按說明書推薦的比例稀釋包被抗體，或者設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)用倍比稀釋的方式稀釋包被抗體，酶標(biāo)孔中加100ul包被抗體包被。酶標(biāo)板加上覆膜，4^oC溫育過夜或37^oC溫育2小時(shí)。

1.2棄去孔內(nèi)液體，每孔用350μL的洗滌液洗滌，浸泡1-2分鐘。在吸水紙上輕拍酶標(biāo)板來移除孔內(nèi)所有液體。此過程也可采用噴射瓶，多道移液器 或自動(dòng)洗板機(jī)來完成。

1.3每孔加入200ul封閉液封閉，37^oC溫育1.5小時(shí)。

1.4 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板1次，方法同步驟1.2。酶標(biāo)板包被抗體完成。

2. 實(shí)驗(yàn)流程

2.1按說明書推薦的方法稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品工作液，或設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)設(shè)定倍比稀釋的多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品工作液。酶標(biāo)板中依次加入100μL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔加100μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，余孔加待測(cè)樣品100μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37^oC溫育1小時(shí)。

2.2 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板1次，方法同步驟1.2。

2.3 按說明書推薦的稀釋倍數(shù)或使用多個(gè)不同稀釋倍數(shù)稀釋檢測(cè)抗體（生物素標(biāo)記的單/多克隆抗體），酶標(biāo)板中每孔加入100μL稀釋后的檢測(cè)抗體，酶標(biāo)板加上覆膜，37^oC溫育1小時(shí)。

2.4 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，方法同步驟1.2。

2.5 每孔加酶標(biāo)親和素工作液（臨用前配制）100μL，酶標(biāo)板覆膜，37^oC溫育30分鐘。

2.6 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟1.2。

2.7 每孔加TMB底物溶液90μL，酶標(biāo)板覆膜，37oC避光顯色（反應(yīng)時(shí)間控制在10-20分鐘，不要超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯時(shí)，即可終止）。

2.8 每孔加終止溶液50μL，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。如出現(xiàn)顏色不勻一，請(qǐng)輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板以使溶液混合均勻。

2.9 在確保酶標(biāo)板底無水滴及孔內(nèi)無氣泡后，立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)或450/630nm雙波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度值（O.D.值）。