酶聯(lián)免疫吸附測定實驗（ELISA）是一種快速、靈敏、準確可靠的定量分析方法，樣本的處理對于ELISA實驗的成功有著舉足輕重的作用。剛開始接觸ELISA的時候，會遇到一些棘手的問題，容易導致實驗出現(xiàn)這樣那樣的狀況。

用于ELISA檢測的常見樣本類型包括血液（血清、血漿），組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清等。這些樣本的收集時間、處理方法和保存方式都會影響ELISA實驗的結(jié)果。下面我們將逐一介紹常見的樣本處理方法，供研究者參考。

一、血液樣本

血液采取后應(yīng)盡快進行處理，使血清（漿）從與血細胞接觸的全血中分離出來。

血清與血漿的區(qū)別：

血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿，故血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均等同于血清。

選擇血清還是血漿樣本？

由于血清中缺乏很多的凝血因子，但有一些凝血產(chǎn)物，如果是測凝血相關(guān)靶分子建議選擇血漿樣本；同時血漿中有纖維蛋白原，如果纖維蛋白原對待檢測指標有影響，建議選擇血清樣本。大多數(shù)情況下二者均可以選擇。

①　血清：將收集于血清分離管中的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1,000×g離心20分鐘，取上清即可，將上清置于-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。 

②　血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1,000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

二、組織勻漿

不同類型的組織制備勻漿的方法會有所不同

1） 取適量組織塊，在預冷PBS（0.01mol/L， pH=7.0-7.2）中清洗去除血液，勻漿前先稱重。

2） 將組織切成小塊，均勻的放入放置在冰上的裝有新鮮裂解緩沖液(貨號IS007，應(yīng)依據(jù)目標蛋白的亞細胞定位選擇不同類型的緩沖液)的玻璃均質(zhì)器中（微小的組織也要如此）。（質(zhì)量體積比=1:20-1:50，例如：1mL裂解緩沖液中加入20-50mg組織樣本。）

3） 將得到的懸濁液經(jīng)過超聲處理至澄清。

4） 將制備好的勻漿液10,000×g離心5分鐘，棄沉淀，上清即可用于檢測或置于-20℃下保存。

三、細胞裂解液

在分析試驗之前，細胞需利用以下方法處理：

1）貼壁細胞應(yīng)該用冷PBS輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，于1,000×g 離心5分鐘后收集。（懸浮細胞可通過離心直接收集）。

2）將收集到的細胞用冷PBS洗3次；

3）將細胞用新鮮裂解緩沖液重懸至密度為10⁷個細胞/毫升，如果需要，細胞可以進行超聲波處理至溶液澄清。

4）將標本于2-8℃ 1,500×g離心10分鐘，棄沉淀，上清即可用于檢測或置于-20℃下保存。

四、細胞培養(yǎng)上清

請1,000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

五、糞便

稱取約100mg(80-120mg)糞便，加入5ml PBS，用渦旋器振蕩40秒。然后勻漿糞便溶液25-30分鐘。取1ml勻漿物于新的EP管中，10,000rpm離心20分鐘。吸取上清液至另一個新的EP管中，即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃ 或-80℃ 保存，但應(yīng)避免反復凍融。

六、尿液

請收集清晨第一次尿液（中段尿），或24小時尿液，2,000×g離心15分鐘后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復凍融。

七、腦脊液

請離心后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復凍融。

樣本的處理是實驗成功的第一步。處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程，由于蛋白容易變性降解，處理過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的保存也非常重要，尤其注意不要反復凍融，樣本處理之后可分裝密封保存， 4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃不應(yīng)超過1個月，-80℃不應(yīng)超過2個月。在標本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。