酶聯(lián)免疫吸附測定實(shí)驗(yàn)（ELISA)-特殊樣本處理方法

之前的專題中我們給大家介紹了常規(guī)樣本諸如血清，血漿，組織細(xì)胞等的處理方法。這一次我們再跟大家普及一些在ELISA檢測中碰到特殊樣本的處理方式。

v 痰液

選擇痰液中較為粘稠部分稱重，加兩倍于痰量的0.1%DTT(二硫蘇糖醇)37攝氏度恒溫水浴振蕩5分鐘，再加入兩倍于痰量的PBS緩沖液繼續(xù)振蕩15-20分鐘，150目的金屬絲網(wǎng)過濾，1,000×g離心10分鐘吸取上清液-20^oC或-80^oC冷凍保存。

v 肺泡灌洗液

1,000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20^oC或-80^oC保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

v 唾液

用唾液樣本采集管收集樣本，然后于2-8^oC 1,000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或分裝后于-20^oC或-80^oC保存。避免反復(fù)凍融。

注意：唾液一般飯后半小時內(nèi)不易采集，因?yàn)閯傔M(jìn)食的唾液中富含唾液淀粉酶，最好空腹時段采集。

v 紅細(xì)胞裂解液：

    1）將全血于1,000×g離心20分鐘，棄上清收集細(xì)胞。

2）將收集的細(xì)胞用預(yù)冷的PBS（pH 7.0-7.2）洗滌三次。

3）用預(yù)冷的PBS重懸細(xì)胞，放于-20^oC冷凍。然后融化細(xì)胞，輕輕混合。反復(fù)凍融三次。

4）于2-8^oC 5,000×g離心10分鐘，除去細(xì)胞碎片。

5）取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20^oC或-80^oC保存，盡量避免反復(fù)凍融。

v 乳汁

將標(biāo)本在2-8^oC 10,000×g離心15分鐘，收集水樣成份，每次離心兩次以上，重復(fù)3次即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20^oC或-80^oC保存，避免反復(fù)凍融。

v 精漿

精液標(biāo)本收集于無菌容器中，室溫或37^oC水浴箱中液化。待精液完全液化后，將精液 4,000 rpm離心10 分鐘分離精漿，即可做ELISA。

v 胸腹水

為防止標(biāo)本采集時出現(xiàn)凝塊、細(xì)胞變性、細(xì)菌破壞自溶等，常規(guī)及細(xì)胞學(xué)檢查胸腹水宜用EDTA-K2 抗凝收集，生化標(biāo)本宜用肝素抗凝收集。收集后即刻離心，2,500r/分鐘離心5分鐘。取上清即可用于檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20^oC或-80^oC保存。

除了動物來源的樣本，還有植物樣本在檢測之前也需要進(jìn)行相應(yīng)的處理。在這里我們選取了2種植物樣本收集處理方法，以供參考：

v 植物樣本中提取化學(xué)分子

1) 取新鮮材料或貯存材料（用100％甲醇固定，放置-10攝氏度冰箱中至待測時）1g，剪碎，加入6ml預(yù)冷的80％甲醇溶液，勻漿5分鐘.

2) 勻漿液在4攝氏度下振蕩（或攪拌）24h，過濾。

3) 殘渣再用2ml甲醇液振蕩1h。反復(fù)二次，濾液混合。

4) 將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上干燥減壓蒸發(fā)（36～38攝氏度）至2ml。

5) 再加入1ml石油醚提取部分色素，棄掉石油醚層，取下層甲醇液層。

6) 繼續(xù)減質(zhì)濃縮至水溶液。在此水溶液中含有IAA、ABA、GA和CTK等。

v 植物樣本中蛋白質(zhì)提取方法

    1）根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)調(diào)整加入量），準(zhǔn)備提取液放在冰上。

    2）把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時）。

    3）用離心機(jī)離心8，000rpm40分鐘（4^oC）或11100rpm20分鐘（4^oC）

    4）提取上清夜，樣品制備完成。

高品質(zhì)的試劑，精確的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。其中正確的操作不僅僅是指實(shí)驗(yàn)操作，樣本的處理也是至關(guān)重要的。