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云克隆HRP-SA質(zhì)量可與Thermo產(chǎn)品媲美

HRP-SA即辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素(SA),由HRPSA交聯(lián)形成,常被作為信號放大器用于生物素化分子的檢測,包括生物素化核酸、蛋白、抗體等,可提高檢測靈敏性。

SA是一個四聚體蛋白,由4條相同的肽鏈組成,分子量為52.8kDa1SA可以高度特異地與4個生物素(Biotin)結(jié)合。SA與雞蛋清來源的親和素(Avidin)相比,非特異性結(jié)合低很多,這是由于SA不含糖基且等電點接近中性。因為SA具有比Avidin低的非特異性背景,故而應用更為廣泛。

HRP穩(wěn)定、分子量小、容易制備,當它與底物孵育時,能產(chǎn)生一種著色、熒光或發(fā)光標記的分子衍生物,因此被廣泛應用于分子生物學、生物化學、免疫學等領域的檢測。

目前,云克隆建立了成熟的原核發(fā)酵技術(shù),可進行高純度(95%SA的大量生產(chǎn)。同時,結(jié)合已有的HRP交聯(lián)技術(shù)平臺,我們已完成HRP-SA的工業(yè)化批量生產(chǎn)。HRP-SA可以在兩個領域內(nèi)大量應用,一是作為體外診斷(IVD)試劑信號放大系統(tǒng)的通用試劑,二是作為科研試劑(ELISA、WB、IHC、Southern等)的顯色系統(tǒng)中信號放大系統(tǒng)的通用試劑。

針對SA的活性,我們通過Green改良法進行了活性檢測,并和其他來源的SA活性進行了比較,結(jié)果如下:

對于交聯(lián)后的HRP-SA的穩(wěn)定性及在各種實驗中的表現(xiàn),檢測數(shù)據(jù)展示如下:

1)穩(wěn)定性檢測

     將即用型HRP-SA37度分別放置0天、3天和7天,使用GAPDH成品檢測試劑盒(貨號:SEB932Hu)進行ELISA檢測,結(jié)果如下:


2IHC檢測

對人乳房組織進行微波抗原修復預處理,接著加入濃度為5μg/mlPCNA抗體(貨號:CAA591Hu22)進行孵育。孵育后添加1μg/ml生物素標記山羊抗鼠二抗(貨號:SAA544Mu17),緊隨其后加入1μg/mlHRP-SA。采用DAB作為顯色劑,組織切片用蘇木精復染,用樹脂封閉后鏡檢,結(jié)果如下:

3ELISA檢測

板底預包被抗OVA抗體(貨號:MAB459Ge21)濃度為2μg/ml,添加OVA,初始濃度為50ng/ml,依次倍比稀釋。稍后添加1μg/ml Biotin標記的抗OVA抗體(貨號:LAB459Ge71)。最后添加1μg/mlHRP-SA進行顯色讀數(shù),結(jié)果如下:

 

完成這些基本檢測后,我們還將不同廠家的HRP-SAELISA實驗中的表現(xiàn)進行了對比。

1)使用GAPDH成品檢測試劑盒(貨號:SEB932Hu)中除檢測液B外的其他試劑和3種不同來源的HRP-SA進行ELISA檢測,結(jié)果如下:


2)任選了10個不同指標成品檢測試劑盒中的除檢測液B外的其他試劑和2不同來源的HRP-SA進行ELISA檢測,結(jié)果如下:

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