在腫瘤免疫治療研究領(lǐng)域，目前發(fā)現(xiàn)了很多免疫檢查點，比如：PD-1、CTLA-4、CD28、Tim-3、TIGIT、LAG3等。其中要數(shù)PD-1/PD-L1通路對腫瘤發(fā)展的抑制作用研究最為深入，大家也最了解。之前雖然大家知道LAG3為免疫檢查點，但它的配體并不明確，使其應(yīng)用起來不太容易。耶魯大學(xué)陳列平教授團隊今年1月份在Cell上發(fā)表了一篇題為“Fibrinogen-like Protein 1 Is a Major Immune Inhibitory Ligand of LAG-3”的文章，LAG3/FGL1通路因此而聲名鵲起，確定了FGL1是LAG3的主要配體，同樣具有對腫瘤發(fā)展的抑制作用。

首先，讓我們分別了解下LAG3和FGL1吧。

LAG3（淋巴細胞激活基因3，Lymphocyte-activation gene 3 ，CD223）是跨膜蛋白，廣泛表達于T細胞等免疫細胞表面，屬于免疫球蛋白超家族，人LAG3胞外段有4個免疫球蛋白樣（Ig-like）功能域。它作為受體可傳遞免疫抑制信號，負調(diào)控CD4⁺和CD8 ⁺T細胞的增殖、活化等。LAG3分子作用很早已經(jīng)明確，但配體一直存有爭議。LAG3與CD4蛋白序列有較高的同源性，都可以和MHC-II分子結(jié)合，但是LAG3的親和力更高。本以為MHC-II分子是LAG3的主要配體，但通過加入LAG3的阻斷抗體（該抗體不影響LAG3與MHC-II的結(jié)合），發(fā)現(xiàn)可以促進腫瘤特異性CD8+T細胞的聚集。此外，研究發(fā)現(xiàn)LAG3不依賴與MHC-II分子的相互作用來抑制CD8+T細胞和NK細胞的功能。這些研究表明LAG3可能由其他配體介導(dǎo)從而發(fā)揮免疫抑制功能。

FGL1（纖維蛋白原相似蛋白1，Hepassocin），又稱為肝細胞來源的纖維蛋白原相關(guān)蛋白1（HFREP-1），屬于纖維蛋白原家族，是一個肝特異性分泌蛋白，以同源二聚體的形式存在，根據(jù)研究報道可促進肝細胞有絲分裂及新陳代謝。FGL1主要在肝臟中表達，研究較多的是FGL1在肝臟相關(guān)疾病中發(fā)揮的作用，但大家沒想到它會和腫瘤發(fā)展有關(guān)系。下面就讓我們看看陳列平教授團隊是如何發(fā)現(xiàn)FGL1是LAG3的主要配體的吧。

首先，研究團隊開發(fā)了一種名為GSRA的技術(shù)，該技術(shù)主要用于快速檢測蛋白和蛋白之間的相互作用。通過GSRA，研究人員發(fā)現(xiàn)FGL1蛋白可與LAG3受體緊密結(jié)合。隨后的流式實驗及生化實驗結(jié)果進一步證實了FGL1和LAG3的結(jié)合。對FGL1蛋白功能進行檢測，發(fā)現(xiàn)當(dāng)FGL1蛋白結(jié)合T細胞表面的LAG3受體時，可抑制T細胞增殖，同時也會影響免疫活性，這兩個蛋白的相互作用不依賴于MHC-II分子。

隨后，研發(fā)人員做了基因敲除實驗，發(fā)現(xiàn)在LAG3或FGL1基因敲除小鼠中移植腫瘤后，腫瘤生長都受到了抑制。同時，當(dāng)使用抗FGL1單克隆抗體和抗LAG3單克隆抗體時，也能抑制小鼠腫瘤模型中腫瘤的生長。此外，基因敲除小鼠中，活化的T細胞數(shù)量都有所增加。以上結(jié)果表明，阻斷FGL1及LAG3的相互作用可以刺激腫瘤微環(huán)境中T細胞的活化和增殖，從而提高機體對腫瘤的免疫與清除。圖示如下：

                                             （注：圖片來源于Cell雜志）

對腫瘤數(shù)據(jù)庫的生物信息學(xué)統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中FGL1的表達水平均有所上升，在非小細胞肺癌（NSCLC）中表達水平很高，在正常肺組織中無表達。對NSCLC患者進行PD-1/PD-L1抑制劑治療，FGL1表達水平高的患者治療效果差。由此可知，FGL1與LAG3的相互作用是獨立于PD-1與PD-L1的。因此，當(dāng)PD-1/PD-L1抑制劑治療效果不佳時，或許可以考慮同時阻斷FGL1/LAG3通路，使免疫治療更加完善。

云克隆針對FGL1/LAG3開發(fā)了一系列產(chǎn)品，可供研究使用。這里簡單介紹下人FGL1重組蛋白（RPD022Hu01）及人LAG3重組蛋白（RPB663Hu01）。人FGL1重組蛋白表達的是除信號肽的全長蛋白，序列為Leu23~Ile312。人LAG3重組蛋白表達的是部分胞外段、整個跨膜區(qū)及部分胞內(nèi)段，序列為Thr244~Glu487。此外還有針對這兩種靶點的單克隆和多克隆抗體以及定量檢測試劑盒。且部分產(chǎn)品已經(jīng)被研究者使用并將成果發(fā)表在論文和專利中。

                                更多信息，歡迎訪問：http://bitrings.com.cn/