Massimiliano Mazzone研究團隊在《Cell Metabolism》上發(fā)表的最新研究進展表明：表達Podoplanin（PDPN）的巨噬細胞能夠促進乳腺癌的淋巴管生成和轉(zhuǎn)移，為研究乳腺癌的發(fā)生發(fā)展提供了新的思路。

研究發(fā)現(xiàn)：PDPN參與腫瘤相關(guān)的巨噬細胞（TAMs）與淋巴管內(nèi)皮細胞（LEC）的粘附。從機制上講，PDPN與LEC來源的galectin 8（GAL8）的結(jié)合，促使Integrin b1被激活。當接近淋巴管時，表達PDPN的TAM亞群（又名PoEMs），刺激局部基質(zhì)重塑并促進血管生長和淋巴侵襲。小鼠模型表明去除PoEMs或抑制galectin 8的作用可抑制乳腺癌細胞的轉(zhuǎn)移，又進一步證實了PoEMs與乳腺癌的臨床相關(guān)性。

具體研究過程和結(jié)論如下：

PoEMs促進基質(zhì)轉(zhuǎn)換和轉(zhuǎn)移：

研究人員以乳腺癌細胞系4T1作為載體，發(fā)現(xiàn)PDPN特異性的高表達于TAM。那么，PDPN⁺ TAMs（即PoEMs）以及PDPN^- TAMs（即non-PoEMs）在腫瘤中的表達空間分布是否會有差異呢？通過組織學(xué)的檢測，發(fā)現(xiàn)PoEMs更多的分布在靠近淋巴管或黏附在淋巴管的位置。Gene ontology富集分析發(fā)現(xiàn)PoEMs的高表達與細胞外基質(zhì)重塑和重組密切相關(guān)，但與細胞因子和生長因子的相關(guān)性卻不大。

PDPN促進腫瘤淋巴管生長和轉(zhuǎn)移：

那么，PDPN高表達發(fā)揮了什么樣的生物學(xué)功能呢？研究人員以WT→WT和PDPN KO→WT小鼠對照，比較淋巴管總面積、管腔大小，發(fā)現(xiàn)PDPN KO→WT小鼠相對于對照組顯著降低，同時發(fā)現(xiàn)CK14⁺的乳腺癌細胞明顯減少。切除淋巴結(jié)后植入4T1乳腺癌細胞，選用肺轉(zhuǎn)移作為評估對象，比較淋巴擴散的速度，發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)切除的WT→WT小鼠肺轉(zhuǎn)移明顯減少，而PDPN KO→WT小鼠幾乎沒有出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移。也就是說，PDPN促進了腫瘤的轉(zhuǎn)移。

以上數(shù)據(jù)可以看出，PoEMs促進腫瘤淋巴管生成和淋巴轉(zhuǎn)移，并有利于癌細胞進入淋巴循環(huán)。

GAL8是乳腺癌轉(zhuǎn)移和進展的關(guān)鍵因素：

GAL8是一種由淋巴管大量表達的分泌性糖結(jié)合蛋白，參與調(diào)節(jié)細胞粘附和遷移，是公認的可作用于PDPN的一種物質(zhì)。在4T1的腫瘤切片中觀察到GAL8表達于腫瘤淋巴管和一些CD45⁺免疫細胞卻并不表達于腫瘤血管。并比較GAL8與PDPN WT 及PDPN KO骨髓來源巨噬細胞（BMDMs）的結(jié)合能力，發(fā)現(xiàn)PDPN缺失之后GAL8的結(jié)合能力明顯受影響。當檢測巨噬細胞的遷移能力的時候，又發(fā)現(xiàn)PDPN缺失之后，巨噬細胞的遷移能力會完全喪失，進一步檢測發(fā)現(xiàn)PDPN的缺失也會影響BMDMs向淋巴內(nèi)皮細胞（LECs）遷移。研究團隊進一步驗證GAL8對TAMs的作用，以腫瘤淋巴管特異性GAL8條件性敲除小鼠作為研究對象，發(fā)現(xiàn)：

1. CD45⁺免疫細胞仍會表達GAL8；

2. 腫瘤淋巴管的區(qū)域明顯減少；

3. TAMs向淋巴管的遷移能力明顯降低；

4. 肺轉(zhuǎn)移明顯減少。

除此之外，PoEMs的遷移和黏附也依賴于GAL8介導(dǎo)的Integrin b1的激活。

我們注意到，在Confocal實驗中用到的抗小鼠GAL8抗體來自于云克隆公司。不得不說，云克隆公司除了ELISA試劑盒之外，抗體也逐漸被大家所認可。

PDPN參與腫瘤微環(huán)境基質(zhì)重塑：

假設(shè)PDPN參與了某些基因上游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，隨機選取前100個上調(diào)型轉(zhuǎn)錄子，發(fā)現(xiàn)其中4個基質(zhì)金屬蛋白酶（Mmp2，Mmp9，Mmp12和 Mmp13）和8個膠原蛋白（Col1a1, Col1a2, Col3a1, Col5a2, Col5a3, Col5a1, Col6a2和 Col6a3）在PoEMs中明顯上調(diào)。有趣的是，靠近腫瘤淋巴管的一群PoEMs大量表達Col1a1和Col1a2，在4T1的組織學(xué)檢測中，也發(fā)現(xiàn)PODN的敲除會減少膠原蛋白的表達。研究發(fā)現(xiàn)PDPN不僅僅只是單純的促進TAMs向腫瘤淋巴管遷移，還會通過基質(zhì)重塑大大促進腫瘤淋巴結(jié)的生長。

PoEMs與乳腺癌的臨床相關(guān)性：

以上的研究為人乳腺癌的研究提供了有力的證據(jù)，將以上研究結(jié)論應(yīng)用于乳腺癌患者，進一步的研究發(fā)現(xiàn)：

1. 人的PoEMs向分泌型GAL8遷移，而non-PoEMs卻并不會；

2. 人PDPN⁺的單核巨噬細胞向LECs遷移的能力比PDPN^-巨噬細胞更強，并且如果沉默表達GAL8的目的基因，該遷移能力將會喪失；

3. 乳腺癌患者有淋巴結(jié)和器官轉(zhuǎn)移時，PoEMs的數(shù)量會明顯增多；

4. 乳腺癌患者的GAL8表達于腫瘤淋巴管和一些浸潤的免疫細胞，而不表達于腫瘤血管。

從目前來看，PoEMs可促進小鼠和人乳腺癌淋巴管生成和淋巴播散，而對于其他腫瘤是否有著類似的作用仍然有待研究，該研究為今后其他腫瘤研究提供了新思路。該研究也再次向我們展示了免疫細胞的特性與它們所處微環(huán)境的密切聯(lián)系。

非常感謝研究人員對云克隆產(chǎn)品的信任，未來的道路仍然任重道遠，但有大家的支持，我們相信我們會越做越好。