活性蛋白—粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)活性蛋白
GM-CSF是一種單體糖蛋白,作為一種細胞因子,可刺激干細胞產(chǎn)生粒細胞(中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞)和單核細胞。眾所周知,人紅系白血病細胞TF-1,白細胞介素3(IL-3)或粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)可促進TF-1細胞增殖。因此,GM-CSF的活性可通過TF-1細胞增殖實驗來測定的。據(jù)報道,GM-CSF也能誘導(dǎo)人單核細胞白血病細胞株U937分化。
實驗方案-1
TF-1細胞作為待刺激細胞,用不同濃度rhGM-CSF與TF-1細胞在96孔微孔板中培養(yǎng),每天用倒置顯微鏡觀察細胞,用CCK-8細胞計數(shù)試劑盒(cell Counting Kit-8)檢測細胞增殖情況。
實驗結(jié)果-1:
I 用GM-CSF(10ng/mL)孵育3d后,TF-1細胞較對照組明顯增殖(Figure 1)。
II 用GM-CSF(1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL)孵育3d后,用CCK-8法檢測TF-1細胞增殖情況,與對照組比較有顯著性差異(Table 1)。
實驗方案-2
U937細胞作為待刺激細胞,用不同濃度的rhGM-CSF(1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL)與U937細胞共培養(yǎng),每天用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化。
實驗結(jié)果-2 U937細胞與GM-CSF(10ng/mL)共培養(yǎng)5天后,可觀察到細胞形態(tài)變化,用GM-CSF(10ng/mL)刺激5天后,U937細胞形態(tài)發(fā)生改變,具有樹突狀細胞的形態(tài)特征(Figure 2)。