非酒精性脂肪肝（Nonalcoholic steatohepa-titis，NASH）是一種較常見的慢性肝病, 組織學(xué)特點(diǎn)類似于酒精性肝病，主要包括肥胖、胰島素抵抗、代謝紊亂等特征，是與肥胖相關(guān)的全身代謝病，可導(dǎo)致癌癥。

2021年3月24日，歐洲多國團(tuán)隊(duì)合作在《Nature》雜志發(fā)表了題為”NASH limits anti-tumour surveillance in immuno-therapy-treated HCC”的文章。這篇文章通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和肝癌患者的臨床分析，發(fā)現(xiàn)CD8 T細(xì)胞參與誘導(dǎo)非酒精性脂肪肝導(dǎo)致的肝癌。更進(jìn)一步研究表明，晚期肝癌患者的Meta分析顯示免疫治療并沒有顯著改善非酒精性脂肪肝導(dǎo)致的肝癌，作者認(rèn)為可能的原因是非酒精性脂肪肝中T細(xì)胞的異?；罨瘜?dǎo)致了免疫監(jiān)視受損。

在這項(xiàng)研究中，研究員用導(dǎo)致進(jìn)行性肝損傷和NASH的飲食喂養(yǎng)小鼠3-12個(gè)月成功建模。白細(xì)胞的單細(xì)胞圖譜顯示NASH小鼠的免疫細(xì)胞組成發(fā)生改變，CD8+PD1+細(xì)胞數(shù)量顯著增加。同樣，在NASH17基因小鼠模型中發(fā)現(xiàn)CD8+和PD1+細(xì)胞數(shù)升高。mRNA原位雜交和免疫組織化學(xué)顯示，肝細(xì)胞和非實(shí)質(zhì)細(xì)胞中PDL1表達(dá)增加與NASH的嚴(yán)重程度相關(guān)。NASH受影響肝臟中CD8+PD1+T細(xì)胞的質(zhì)譜特征表明，參與持續(xù)T細(xì)胞活化和分化、TNF信號(hào)和自然殺傷（NK）細(xì)胞樣細(xì)胞毒性的途徑中富集。對(duì)NASH小鼠肝臟中表達(dá)T細(xì)胞受體β鏈（TCRβ）的細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞RNA測(cè)序（scRNA-seq）表明，CD8+T細(xì)胞具有與細(xì)胞毒性和效應(yīng)器功能相關(guān)的基因表達(dá)譜（例如Gzmk和Gzmm）和具有高耗竭特征的炎癥標(biāo)記物（例如Ccl3）。RNA-velocity分析顯示，自表達(dá)CD8+到CD8+PD1+T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性和分化增強(qiáng)，提示局部分化。因此，NASH小鼠肝臟CD8+PD1+T細(xì)胞豐度增加，具有衰竭和效應(yīng)功能。

a. 免疫組化法檢測(cè)正常飲食（ND）、CD-HFD和西式反式脂肪飲食（WD-HTF）小鼠T細(xì)胞的CD8和PD1染色（右）和定量（左）。b. 基于免疫熒光的PD1（綠色）、CD8（紅色）和CD4（黃色）細(xì)胞檢測(cè)。c. 質(zhì)譜法分離TCRβ+細(xì)胞的肝CD8+PD1+T細(xì)胞GSEA。FDR，錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率；NES，標(biāo)準(zhǔn)化富集分?jǐn)?shù)。TCRβ+細(xì)胞的d-f、t-分布隨機(jī)鄰近嵌入（tSNE）、scRNA序列差異表達(dá)（e）和實(shí)驗(yàn)方案（f）：小鼠喂CD-HFD 13個(gè)月，然后用抗PD1治療8周，然后測(cè)量腫瘤發(fā)生率。g. CD-HFD治療組和未治療組小鼠的肝臟。箭頭：腫瘤或病變。h. 免疫組化法定量檢測(cè)肝臟CD8+細(xì)胞。

NASH中大量的T細(xì)胞表明抗PD1靶向免疫治療可能是治療NASH-HCC的有效方法。喂食膽堿缺乏高脂肪飲食（CD-HFD）13個(gè)月的C57BL/6小鼠中，30%的小鼠發(fā)生了肝腫瘤，其遺傳改變與人類NAFLD-HCC或NASH-HCC相似。攜帶HCC的NASH小鼠（通過MRI鑒定）被分配到抗PD1免疫治療或?qū)φ战M。在抗PD1治療后，所有已存在的肝腫瘤均未消退。相反，研究者觀察到抗PD1治療后肝纖維化增加，肝損傷不變，肝癌發(fā)病率略有增加，腫瘤負(fù)荷和大小不變。在抗PD1治療的小鼠中，肝腫瘤組織含有更多的CD8+/PD1+T細(xì)胞和高水平表達(dá)Cxcr6或Tnf mRNA的細(xì)胞?？筆DL1免疫治療后NASH誘導(dǎo)的肝癌沒有消退。相比之下，其他（非NASH）肝癌小鼠模型（伴有或不伴有損傷）對(duì)PD1免疫治療有反應(yīng)，伴有腫瘤消退，表明免疫治療缺乏反應(yīng)與NASH–HCC特別相關(guān)。因此，NASH排除了HCC免疫治療中有效的抗腫瘤監(jiān)測(cè)。類似地，在NASH和繼發(fā)性肝癌的小鼠模型中也描述了免疫治療受損。

在NASH誘導(dǎo)的HCC臨床前模型中，以程序性死亡-1（PD1）為靶點(diǎn)的治療性免疫治療使腫瘤內(nèi)活化的CD8+PD1+T細(xì)胞擴(kuò)增，但并未導(dǎo)致腫瘤消退，提示腫瘤免疫監(jiān)視功能受損。當(dāng)給予預(yù)防性治療時(shí)，抗PD1治療導(dǎo)致NASH-HCC的發(fā)病率增加，腫瘤結(jié)節(jié)的數(shù)量和大小增加，與肝CD8+、PD1+、CXCR6+、TOX+和TNF+T細(xì)胞增加相關(guān)?？筆D1治療引發(fā)的HCC增加可通過CD8+T細(xì)胞的耗竭或TNF中和來阻止，這表明CD8+T細(xì)胞有助于誘導(dǎo)NASH-HCC，而不是增強(qiáng)或執(zhí)行免疫監(jiān)視。在NAFLD和NASH患者的肝CD8+PD1+T細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了相似的表型和功能特征。研究員對(duì)1600多名晚期肝癌患者進(jìn)行PDL1（程序性死亡配體1）或PD1抑制劑檢測(cè)的三項(xiàng)隨機(jī)III期臨床試驗(yàn)的Meta分析顯示，免疫治療不能提高非病毒性肝癌患者的生存率。在另外兩個(gè)隊(duì)列中，接受抗PD1或抗PDL1治療的NASH驅(qū)動(dòng)的HCC患者與其他病因的患者相比，總生存率降低。總的來說，這些數(shù)據(jù)表明非病毒性HCC，尤其是NASH-HCC，對(duì)免疫治療的反應(yīng)可能較低，可能是由于NASH相關(guān)的異常T細(xì)胞活化導(dǎo)致組織損傷，導(dǎo)致免疫監(jiān)視受損。

云克隆也為廣大研究者提供相應(yīng)檢測(cè)產(chǎn)品，相關(guān)指標(biāo)如下：