神經(jīng)氨酸酶（Neuraminidase，NEU）是一種能分解（切斷）神經(jīng)氨酸糖苷鍵的糖苷水解酶。人類基因組中發(fā)現(xiàn)至少4種哺乳動(dòng)物唾液酸酯酶同源物（見(jiàn)NEU1、NEU2、NEU3、NEU4）。體內(nèi)缺乏神經(jīng)氨酸酶，導(dǎo)致低聚糖在體內(nèi)細(xì)胞中貯積，會(huì)引發(fā)唾液酸貯積癥。在細(xì)胞內(nèi)，組織蛋白酶A（Cathepsin A，CTSA）殘基在溶酶體內(nèi)與β-半乳糖苷酶（Galactosidase Beta，GLb）和神經(jīng)氨酸酶NEU組成高分子量復(fù)合物。CTSA與這些糖苷酶的相互作用對(duì)它們進(jìn)入溶酶體的正確途徑是必須的，并防止它們發(fā)生溶酶體內(nèi)水解。

實(shí)驗(yàn)原理：神經(jīng)氨酸酶NEU可與CTSA結(jié)合。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)結(jié)合ELISA檢測(cè)重組人NEU和重組CTSA蛋白的相互作用。

實(shí)驗(yàn)方法：用含有0.01% BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀釋NEU。將100μL樣品移入CTSA蛋白預(yù)包被酶標(biāo)板中，37℃孵育2小時(shí)。棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗滌。除去洗液，加入抗NEU-pAb孵育1小時(shí)，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗孵育后，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。加入底物溶液后，在37℃下孵育15-25分鐘。最后，向孔中加入50μL終止液，立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：NEU和CTSA的結(jié)合活性如Figure 1所示，結(jié)合活性呈劑量依賴性。

云克隆產(chǎn)品

APB611Hu02  Active Neuraminidase (NEU)