前列腺癌是男性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，盡管初期治療如使用雄激素剝奪療法（ADT）有效，但許多患者最終還是會(huì)發(fā)展為晚期轉(zhuǎn)移性去勢(shì)抵抗性前列腺癌（mCRPC）并因此死亡。免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）在多種癌癥治療中顯示出潛力，但在mCRPC患者中目前無(wú)效。因此，研究mCRPC中免疫治療抵抗的機(jī)制，以及如何克服這種抵抗，是當(dāng)前臨床治療的一個(gè)重要問(wèn)題。2024年12月，《Nature》雜志上發(fā)表了一篇題為“Evolution of myeloid-mediated immunotherapy resistance in prostate cancer”的文章，在這項(xiàng)研究中，研究者探討了髓系細(xì)胞介導(dǎo)的免疫治療抵抗在前列腺癌中的演變，在mCRPC中發(fā)現(xiàn)了一種特定的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（SPP1^hi-TAMs）與ICIs抵抗之間的關(guān)系，提出了通過(guò)抑制腺苷A2A受體（A2ARs）來(lái)逆轉(zhuǎn)這種抵抗的策略。

研究者們利用單細(xì)胞RNA測(cè)序（scRNA - seq）技術(shù)，對(duì)前列腺癌患者的腫瘤活檢樣本進(jìn)行分析。樣本包括未經(jīng)ADT治療的局部前列腺癌、接受ADT治療的轉(zhuǎn)移性激素敏感性前列腺癌（HSPC）以及在ADT治療下進(jìn)展為mCRPC的患者。通過(guò)差異表達(dá)基因分析，定義了腫瘤細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境（TME）的主要成分。無(wú)監(jiān)督聚類(lèi)分析識(shí)別出8個(gè)巨噬細(xì)胞亞群，2個(gè)髓系來(lái)源抑制細(xì)胞（MDSC）亞群，3個(gè)樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）亞群和漿細(xì)胞樣DC（pDCs）。研究者發(fā)現(xiàn)在疾病進(jìn)展過(guò)程中，以SPP1轉(zhuǎn)錄水平升高為特征的巨噬細(xì)胞數(shù)量顯著增加，SPP1^hi - TAMs表現(xiàn)出比其他髓系細(xì)胞亞群更高的免疫抑制分子程序。SPP1^hi - TAM基因信號(hào)的升高與CD8⁺ T細(xì)胞衰竭程度顯著相關(guān)，且隨著疾病的進(jìn)展，衰竭程度顯著增加。這些結(jié)果表明，前列腺癌的進(jìn)展導(dǎo)致TME內(nèi)髓系細(xì)胞組成的動(dòng)態(tài)變化，其中SPP1^hi - TAMs成為免疫治療耐藥性的潛在驅(qū)動(dòng)因素。

MyC-CaP是一種依賴(lài)雄激素的前列腺癌細(xì)胞系，源自患有前列腺癌的雄性小鼠。研究者對(duì)從皮下移植MyC-CaP的小鼠中分離的免疫（CD45⁺）和非免疫（CD45^-）細(xì)胞，用醋酸地加瑞克（促性腺激素釋放激素拮抗劑）或磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）處理細(xì)胞，地加瑞克處理后腫瘤負(fù)荷顯著消退，隨后進(jìn)展為CRPC。通過(guò)使用scRNA-seq，鑒定了TME中的6種主要細(xì)胞類(lèi)型，以及11種不同的髓細(xì)胞亞群。通過(guò)對(duì)人和小鼠轉(zhuǎn)錄組的比較分析，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)類(lèi)似于人SPP1^hi - TAMs的小鼠巨噬細(xì)胞亞群（Spp1^hi - TAMs），其特征是Spp1、Cd9和Lgals3轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)增加，而Csf1r、Mrc1、Cx3cr1和Cd163的表達(dá)減少。為了確定Spp1^hi - TAMs是否對(duì)CSF1R阻斷具有抗性，研究者給攜帶CRPC的小鼠注射了抗CSF1R抗體，高表達(dá)Csf1r的巨噬細(xì)胞被顯著消融，但Spp1^hi - TAMs基本未受影響，這表明Spp1^hi - TAMs在CSF1R阻斷處理耐藥性中具有潛在作用。

接著研究人員測(cè)試了Spp1^hi - TAMs是否能在體內(nèi)促進(jìn)對(duì)ICIs的耐藥性。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抗CTLA-4和抗PD-1抗體聯(lián)合使用比單獨(dú)使用更能顯著降低CRPC的生長(zhǎng)。為了驗(yàn)證Spp1^hi - TAMs能介導(dǎo)免疫治療耐藥性，降低雙聯(lián)處理的有效性。在使用抗CTLA-4和抗PD-1聯(lián)合處理的情況下，研究者將通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)純化的Spp1^hi - TAMs轉(zhuǎn)移到CRPC腫瘤中，最大限度地減少了Spp1^hi - TAMs轉(zhuǎn)運(yùn)到TME的潛在問(wèn)題。瘤內(nèi)轉(zhuǎn)移的Spp1^hi - TAMs導(dǎo)致聯(lián)合處理的效果顯著降低，與對(duì)照組PBS和ICIs處理的腫瘤相比，Spp1^hi - TAMs和ICIs處理顯著增加了腫瘤中耗盡CD8⁺ T細(xì)胞的頻率。這些結(jié)果表明Spp1^hi - TAMs在驅(qū)動(dòng)CRPC的免疫治療耐藥性方面起著關(guān)鍵作用。

通過(guò)通路分析，研究者們確定了腺苷信號(hào)是SPP1^hi-TAMs介導(dǎo)的免疫治療抵抗的潛在機(jī)制。在體外實(shí)驗(yàn)中，抑制腺苷A2A受體（A2ARs）顯著逆轉(zhuǎn)了Spp1^hi - TAMs介導(dǎo)的CD8⁺ T細(xì)胞免疫抑制。分析顯示，與人類(lèi)和小鼠的其他髓系亞群相比，SPP1^hi-TAMs中NT5E的轉(zhuǎn)錄水平升高，且在mCRPC階段更高。通過(guò)使用小分子抑制劑和阻斷抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，證明腺苷密切參與Spp1^hi-TAMs的免疫抑制活動(dòng)，但抑制腺苷途徑不足以完全恢復(fù)T細(xì)胞增殖，提示還有其他機(jī)制促使Spp1^hi-TAMs驅(qū)動(dòng)免疫治療耐藥。（見(jiàn)圖4）

研究者用A2ARs抑制劑ciforadenant處理攜帶CRPC的小鼠，發(fā)現(xiàn)阻斷A2ARs導(dǎo)致CRPC的生長(zhǎng)顯著減少。鑒于用ciforadenant處理后，耗竭的CD8⁺ T細(xì)胞和Spp1^hi -TAMs的豐富度顯著降低，研究者推測(cè)A2AR阻斷可能會(huì)增強(qiáng)ICIs的療效。于是，研究人員給患有CRPC的小鼠聯(lián)合使用ciforadenant和抗PD-1，A2AR和PD-1的雙重阻斷導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)的減少幅度顯著大于單一療法，表明A2AR抑制有助于增強(qiáng)免疫檢查點(diǎn)抑制劑在CRPC中的療效。對(duì)淋巴細(xì)胞亞群評(píng)估發(fā)現(xiàn)，ciforadenant可增加多功能 CD8⁺ T細(xì)胞的頻率，PD-1阻斷可增強(qiáng) T 細(xì)胞和NK細(xì)胞向腫瘤的浸潤(rùn)，聯(lián)合使用可增加多功能CD8⁺ T細(xì)胞的密度，提示聯(lián)合處理增強(qiáng)抗腫瘤活性的潛在機(jī)制。

在臨床試驗(yàn)中，評(píng)估A2AR阻斷對(duì)人類(lèi)免疫治療耐藥性的影響，對(duì)mCRPC患者單獨(dú)使用 ciforadenant（n = 11）或與阿替利珠單抗（atezolizumab）聯(lián)合使用（n = 24）。該治療方案耐受性良好，主要副作用發(fā)生率很低。24名聯(lián)合用藥患者中有6名（25%）前列腺特異性抗原水平較基線下降30%及以上，且部分有可測(cè)量病灶的患者觀察到腫瘤縮小。此外，抑制A2ARs還導(dǎo)致CRPC中SPP1^hi-TAMs的豐度顯著下降，表明這一途徑在誘導(dǎo)和下游免疫抑制中都具有作用。這些發(fā)現(xiàn)表明，針對(duì)腺苷信號(hào)的治療干預(yù)可能是使mCRPC對(duì)ICIs治療敏感的潛在策略。（見(jiàn)圖5）

總的來(lái)說(shuō)，這些研究確定了SPP1^hi-TAMs作為mCRPC中ICIs抵抗的關(guān)鍵介質(zhì)，并強(qiáng)調(diào)了它們作為治療靶點(diǎn)和預(yù)測(cè)治療效果潛在生物標(biāo)志物的重要性。這些發(fā)現(xiàn)為前列腺癌的免疫治療提供了新的視角，并為克服免疫治療抵抗提供了潛在的策略。

云克隆開(kāi)發(fā)了上述研究中涉及的相關(guān)指標(biāo)的蛋白、抗體、ELISA試劑盒等產(chǎn)品以助力相關(guān)研究，部分指標(biāo)節(jié)選如下，供參考：