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巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)與巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSF-R)的結合活性檢測
巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF),也稱為CSF-1,是一種分泌型細胞因子,它可以影響造血干細胞分化為巨噬細胞或其他相關細胞。 M-CSF是造血生長因子,參與單核細胞,巨噬細胞和骨髓祖細胞的增殖,分化和存活。它還通過吞噬和趨化活性影響巨噬細胞和單核細胞,并增加了腫瘤細胞的細胞毒性。M-CSF的作用不僅限于單核細胞/巨噬細胞,通過與膜受體相互作用(C-fms編碼的CSF1R或M-CSF-R原癌基因),M-CSF還可以調節(jié)早期造血細胞的增殖,并影響多種免疫、新陳代謝、生育能力和懷孕相關的生理過程。此外,巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSF-R......
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骨橋素活性蛋白誘導促炎趨化因子MCP-1的高表達
骨橋素(Osteopontin,OPN),是一種多功能磷酸化糖蛋白,在中性粒細胞的募集中發(fā)揮有重要的作用,并可誘導促炎趨化因子的表達,如:MCP-1,MIP-1β。據(jù)報道,在乳腺癌細胞系MCF-7中,OPN可通過NF-kappa B信號通路誘導MCP-1的高表達。實驗目的:觀察在MCF-7細胞系中,OPN蛋白是否能誘導MCP-1高表達來驗證OPN蛋白的活性。實驗步驟:1.將MCF-7細胞以細胞密度1x105/ml過夜培養(yǎng);2.分別以100ng/ml,200ng/ml的OPN蛋白與MCF-7細胞共培養(yǎng)24h;3.ELISA檢測細胞上清中MCP-1的含量。實驗結果:實驗結論:克隆OPN活性蛋白可誘導MCF-7細胞上清中......
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IGF1活性蛋白的促細胞增殖作用
胰島素樣生長因子1(IGF1),又稱生長調節(jié)素C,是一種在分子結構上類似于胰島素但其促生長活性更強于胰島素的低分子肽。據(jù)報道,IGF1能誘導多種細胞的增殖、遷移和分化,其中包括人乳腺癌細胞系MCF7。本實驗通過觀察IGF1活性蛋白對MCF7細胞系的促增殖作用來評估IGF1蛋白的活性。實驗方案:1.將MCF-7細胞接種到96孔板中,接種3復孔,調整每孔細胞數(shù)2000個,培養(yǎng)過夜待細胞貼壁;2.更換為無血清的DMEM培養(yǎng)基,并加入不同濃度的IGF1蛋白,培養(yǎng)72小時;3.在倒置顯微鏡下觀察細胞增殖的情況,并用CCK-8試劑盒進行細胞增殖的檢測(每孔加......
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活性蛋白—腫瘤壞死因子β(TNFb)活性蛋白
TNF-β是腫瘤壞死因子家族成員之一,是一種對多種腫瘤細胞具有細胞毒作用的強淋巴因子。TNF-β與TNF-α在分子結構和受體的相似性,決定了這兩個分子具有非常相似的生物學效應。根據(jù)報道,TNF-α可抑制A549細胞增殖和誘導凋亡,刺激后細胞上清液中IL-1β濃度升高。實驗證明,TNF-β也具有類似生物活性。實驗方法:將A549細胞與TNF-β(10ng/mL)混合培養(yǎng)8h、24h、48h、72h后,分別用倒置顯微鏡觀察細胞,ELISA法檢測細胞上清液中IL-1β的含量。結果1:TNF-β(10ng/mL)作用細胞72h后,細胞凋亡明顯。結果2:加入TNF-β(10ng/mL),細胞孵育8h......
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活性蛋白—粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)活性蛋白
GM-CSF是一種單體糖蛋白,作為一種細胞因子,可刺激干細胞產生粒細胞(中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞)和單核細胞。眾所周知,人紅系白血病細胞TF-1,白細胞介素3(IL-3)或粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)可促進TF-1細胞增殖。因此,GM-CSF的活性可通過TF-1細胞增殖實驗來測定的。據(jù)報道,GM-CSF也能誘導人單核細胞白血病細胞株U937分化。實驗方案-1TF-1細胞作為待刺激細胞,用不同濃度rhGM-CSF與TF-1細胞在96孔微孔板中培養(yǎng),每天用倒置顯微鏡觀察細胞,用CCK-8細胞計數(shù)試劑盒(cell Counting Kit-8)檢測細胞增......
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MIP1a活性蛋白對THP1細胞的趨化作用
巨噬細胞炎性蛋白1α(Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha, MIP1a),又名趨化因子配體3(CCL3),屬于趨化因子家族。MIP1a參與巨噬細胞、單核細胞和中性粒細胞的聚集及激活。實驗目的:評估MIP1a活性蛋白對單核細胞系THP1的趨化作用。實驗方案:1.將THP1細胞培養(yǎng)在0.5% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基中;2.用無血清的RPMI 1640培養(yǎng)基將MIP1a活性蛋白稀釋至100ng/mL;3.將100ng/mL的MIP1a活性蛋白加入THP1細胞中;4.在37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)5小時;5.在不同的顯微鏡視野下觀察并計數(shù)細胞遷移的數(shù)量。實驗結果:A.加入100ng/mL的MIP1a活......
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NGF活性蛋白誘導PC12細胞分化及其結合活性的驗證
NGF活性蛋白誘導PC12細胞分化實驗實驗原理:神經生產因子(Nerve growth factor, NGF)是一種神經營養(yǎng)因子和神經肽,主要參與某些神經元的生長發(fā)育、維持、再生長和分化作用。PC12細胞株來源于一種可移植的鼠嗜鉻細胞瘤,該細胞對NGF有可逆的神經元顯形反應,當PC12細胞暴露在NGF,細胞會在一周之內作出反應,主要是停止細胞分裂并延伸神經突。實驗方案:PC12細胞培養(yǎng)在含5%胎牛血清和10%馬血清的Ham's F12K培養(yǎng)基中,當細胞到達對數(shù)生長期時,換用含有10ng/ml NGF重組蛋白的新鮮培養(yǎng)基,在倒置顯微鏡下每天觀察細胞的形態(tài)。實......
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IL4活性蛋白誘導THP1細胞的分化實驗
白細胞介素4(IL4)是II型輔助T細胞(Th2細胞)分泌的一種細胞因子。它有很多的生物學作用,包括:刺激活化B細胞和T細胞增殖;對于B細胞、T細胞、肥大細胞、巨噬細胞和造血細胞均有免疫調節(jié)作用。實驗原理:體外培養(yǎng)狀態(tài)下,外源性的IL4可誘導THP1細胞分化為樹突狀細胞和巨噬細胞。實驗過程:將THP1細胞置于RPMI-1640培養(yǎng)基中,以2ng/mL IL4進行刺激。7天后,觀察細胞的形態(tài)變化。實驗結果:7天后,對比細胞的形態(tài)變化,如下:A.以IL4刺激后THP1細胞B.未刺激的THP1細胞實驗結果:通過觀察細胞的形態(tài)變化,可以發(fā)現(xiàn)用IL4刺激7天后的T......