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  • 巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)與巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體(M-CSF-R)的結(jié)合活性檢測

    巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF),也稱為CSF-1,是一種分泌型細(xì)胞因子,它可以影響造血干細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞或其他相關(guān)細(xì)胞。 M-CSF是造血生長因子,參與單核細(xì)胞,巨噬細(xì)胞和骨髓祖細(xì)胞的增殖,分化和存活。它還通過吞噬和趨化活性影響巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞,并增加了腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性。M-CSF的作用不僅限于單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞,通過與膜受體相互作用(C-fms編碼的CSF1R或M-CSF-R原癌基因),M-CSF還可以調(diào)節(jié)早期造血細(xì)胞的增殖,并影響多種免疫、新陳代謝、生育能力和懷孕相關(guān)的生理過程。此外,巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體(M-CSF-R......

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  • 骨橋素活性蛋白誘導(dǎo)促炎趨化因子MCP-1的高表達(dá)

    骨橋素(Osteopontin,OPN),是一種多功能磷酸化糖蛋白,在中性粒細(xì)胞的募集中發(fā)揮有重要的作用,并可誘導(dǎo)促炎趨化因子的表達(dá),如:MCP-1,MIP-1β。據(jù)報道,在乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中,OPN可通過NF-kappa B信號通路誘導(dǎo)MCP-1的高表達(dá)。實驗?zāi)康模河^察在MCF-7細(xì)胞系中,OPN蛋白是否能誘導(dǎo)MCP-1高表達(dá)來驗證OPN蛋白的活性。實驗步驟:1.將MCF-7細(xì)胞以細(xì)胞密度1x105/ml過夜培養(yǎng);2.分別以100ng/ml,200ng/ml的OPN蛋白與MCF-7細(xì)胞共培養(yǎng)24h;3.ELISA檢測細(xì)胞上清中MCP-1的含量。實驗結(jié)果:實驗結(jié)論:克隆OPN活性蛋白可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞上清中......

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  • IGF1活性蛋白的促細(xì)胞增殖作用

    胰島素樣生長因子1(IGF1),又稱生長調(diào)節(jié)素C,是一種在分子結(jié)構(gòu)上類似于胰島素但其促生長活性更強于胰島素的低分子肽。據(jù)報道,IGF1能誘導(dǎo)多種細(xì)胞的增殖、遷移和分化,其中包括人乳腺癌細(xì)胞系MCF7。本實驗通過觀察IGF1活性蛋白對MCF7細(xì)胞系的促增殖作用來評估IGF1蛋白的活性。實驗方案:1.將MCF-7細(xì)胞接種到96孔板中,接種3復(fù)孔,調(diào)整每孔細(xì)胞數(shù)2000個,培養(yǎng)過夜待細(xì)胞貼壁;2.更換為無血清的DMEM培養(yǎng)基,并加入不同濃度的IGF1蛋白,培養(yǎng)72小時;3.在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞增殖的情況,并用CCK-8試劑盒進(jìn)行細(xì)胞增殖的檢測(每孔加......

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  • 活性蛋白—腫瘤壞死因子β(TNFb)活性蛋白

    TNF-β是腫瘤壞死因子家族成員之一,是一種對多種腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用的強淋巴因子。TNF-β與TNF-α在分子結(jié)構(gòu)和受體的相似性,決定了這兩個分子具有非常相似的生物學(xué)效應(yīng)。根據(jù)報道,TNF-α可抑制A549細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡,刺激后細(xì)胞上清液中IL-1β濃度升高。實驗證明,TNF-β也具有類似生物活性。實驗方法:將A549細(xì)胞與TNF-β(10ng/mL)混合培養(yǎng)8h、24h、48h、72h后,分別用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞,ELISA法檢測細(xì)胞上清液中IL-1β的含量。結(jié)果1:TNF-β(10ng/mL)作用細(xì)胞72h后,細(xì)胞凋亡明顯。結(jié)果2:加入TNF-β(10ng/mL),細(xì)胞孵育8h......

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  • 活性蛋白—粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)活性蛋白

    GM-CSF是一種單體糖蛋白,作為一種細(xì)胞因子,可刺激干細(xì)胞產(chǎn)生粒細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞)和單核細(xì)胞。眾所周知,人紅系白血病細(xì)胞TF-1,白細(xì)胞介素3(IL-3)或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)可促進(jìn)TF-1細(xì)胞增殖。因此,GM-CSF的活性可通過TF-1細(xì)胞增殖實驗來測定的。據(jù)報道,GM-CSF也能誘導(dǎo)人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株U937分化。實驗方案-1TF-1細(xì)胞作為待刺激細(xì)胞,用不同濃度rhGM-CSF與TF-1細(xì)胞在96孔微孔板中培養(yǎng),每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞,用CCK-8細(xì)胞計數(shù)試劑盒(cell Counting Kit-8)檢測細(xì)胞增......

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  • MIP1a活性蛋白對THP1細(xì)胞的趨化作用

    巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha, MIP1a),又名趨化因子配體3(CCL3),屬于趨化因子家族。MIP1a參與巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的聚集及激活。實驗?zāi)康模涸u估MIP1a活性蛋白對單核細(xì)胞系THP1的趨化作用。實驗方案:1.將THP1細(xì)胞培養(yǎng)在0.5% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基中;2.用無血清的RPMI 1640培養(yǎng)基將MIP1a活性蛋白稀釋至100ng/mL;3.將100ng/mL的MIP1a活性蛋白加入THP1細(xì)胞中;4.在37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)5小時;5.在不同的顯微鏡視野下觀察并計數(shù)細(xì)胞遷移的數(shù)量。實驗結(jié)果:A.加入100ng/mL的MIP1a活......

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  • NGF活性蛋白誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化及其結(jié)合活性的驗證

    NGF活性蛋白誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化實驗實驗原理:神經(jīng)生產(chǎn)因子(Nerve growth factor, NGF)是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)肽,主要參與某些神經(jīng)元的生長發(fā)育、維持、再生長和分化作用。PC12細(xì)胞株來源于一種可移植的鼠嗜鉻細(xì)胞瘤,該細(xì)胞對NGF有可逆的神經(jīng)元顯形反應(yīng),當(dāng)PC12細(xì)胞暴露在NGF,細(xì)胞會在一周之內(nèi)作出反應(yīng),主要是停止細(xì)胞分裂并延伸神經(jīng)突。實驗方案:PC12細(xì)胞培養(yǎng)在含5%胎牛血清和10%馬血清的Ham's F12K培養(yǎng)基中,當(dāng)細(xì)胞到達(dá)對數(shù)生長期時,換用含有10ng/ml NGF重組蛋白的新鮮培養(yǎng)基,在倒置顯微鏡下每天觀察細(xì)胞的形態(tài)。實......

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  • IL4活性蛋白誘導(dǎo)THP1細(xì)胞的分化實驗

    白細(xì)胞介素4(IL4)是II型輔助T細(xì)胞(Th2細(xì)胞)分泌的一種細(xì)胞因子。它有很多的生物學(xué)作用,包括:刺激活化B細(xì)胞和T細(xì)胞增殖;對于B細(xì)胞、T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和造血細(xì)胞均有免疫調(diào)節(jié)作用。實驗原理:體外培養(yǎng)狀態(tài)下,外源性的IL4可誘導(dǎo)THP1細(xì)胞分化為樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。實驗過程:將THP1細(xì)胞置于RPMI-1640培養(yǎng)基中,以2ng/mL IL4進(jìn)行刺激。7天后,觀察細(xì)胞的形態(tài)變化。實驗結(jié)果:7天后,對比細(xì)胞的形態(tài)變化,如下:A.以IL4刺激后THP1細(xì)胞B.未刺激的THP1細(xì)胞實驗結(jié)果:通過觀察細(xì)胞的形態(tài)變化,可以發(fā)現(xiàn)用IL4刺激7天后的T......

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