實(shí)驗(yàn)原理：Glutathione S Transferase Pi (GSTp)谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶是體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化最重要的Ⅱ相代謝酶之一，是細(xì)胞抗損傷、抗癌變的主要解毒系統(tǒng)。它能催化機(jī)體內(nèi)有害極性化合物與谷胱甘肽結(jié)合，防止DNA損害，還可以由非酶結(jié)合方式將體內(nèi)各種潛在毒性化學(xué)藥物從體內(nèi)排出。GSTp能催化內(nèi)源性谷胱甘肽與1-氯-2,4-二硝基苯（CDNB）結(jié)合形成2,4-二硝基苯-谷胱甘肽復(fù)合物，在340nm處有吸收峰。因此，測(cè)定產(chǎn)物生成量可反映GSTp的活性。試劑：100mM NaH2PO4 緩沖液，pH7.0200mM L-谷胱甘肽（還原型）100mM 1-氯-2,4-二硝基苯（CDNB）實(shí)驗(yàn)步驟......

樣本裂解液的制備1. 細(xì)胞裂解液的制備1）收集細(xì)胞：將細(xì)胞懸液（懸浮細(xì)胞直接收集，貼壁細(xì)胞可以用細(xì)胞刮或者胰酶消化后收集）收集于離心管中，4℃ 1500rpm離心5min后收集細(xì)胞沉淀；用預(yù)冷的1×PBS洗滌細(xì)胞2次，收集細(xì)胞沉淀。2）裂解細(xì)胞：向細(xì)胞沉淀中加入提前預(yù)冷的裂解液（裂解液在臨用前加入蛋白酶抑制劑），用槍頭將細(xì)胞團(tuán)塊吹散，放要床上冰上裂解30min（如果細(xì)胞溶解不完全，冰上短時(shí)超聲裂解1-2min）。3）4℃10000rpm離心10min，取適量上清測(cè)蛋白濃度，剩余上清根據(jù)需求分裝與1.5ml EP管中，置于-80℃冰箱保存。2. 組織樣本裂......

一 實(shí)驗(yàn)材料及試劑96孔細(xì)胞培養(yǎng)板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、微量移液器、酶標(biāo)儀、CCK-8試劑盒等。二 實(shí)驗(yàn)步驟1.取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞制備成一定濃度的細(xì)胞懸液，每孔100ul加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入2×103個(gè)/100ul 細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入5×103個(gè)細(xì)胞/100ul （具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小、細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。如果是貼壁細(xì)胞，需要37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)2-4小時(shí)等細(xì)胞貼壁后再開展實(shí)驗(yàn)，如果是懸浮細(xì)胞，不需要預(yù)培養(yǎng)。2.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，在培養(yǎng)孔中加入0-10ul待測(cè)樣本繼續(xù)培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)......

一、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞胞膜分子1.細(xì)胞重懸：細(xì)胞處理計(jì)數(shù)后，用細(xì)胞洗液（含2% BSA的PBS）重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度為1×107/mL；2.對(duì)照設(shè)置：空白對(duì)照、同型對(duì)照、待測(cè)樣本每管取100uL上述重懸的細(xì)胞，使每管細(xì)胞數(shù)達(dá)到1×106/管；3.一抗孵育：空白對(duì)照管不加抗體，同型對(duì)照管和待測(cè)樣本管分別加入5-20uL同型抗體和靶標(biāo)抗體（具體使用量參照說明書），充分混勻，至4℃孵育30min或冬季可至于室溫孵育30min，孵育期間每隔10min晃動(dòng)一下反應(yīng)管，使細(xì)胞和抗體充分反應(yīng)；4.細(xì)胞清洗：加入適量細(xì)胞洗液，1000rpm離心5min，棄上清，反復(fù)洗滌2次......

1、酶標(biāo)板包被抗體流程：1.1按說明書推薦的比例稀釋包被抗體，或者設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)用倍比稀釋的方式稀釋包被抗體，酶標(biāo)孔中加100ul包被抗體包被。酶標(biāo)板加上覆膜，4℃溫育過夜或37℃溫育2小時(shí)。1.2棄去孔內(nèi)液體，每孔用350μL的洗滌液洗滌，浸泡1-2分鐘。在吸水紙上輕拍酶標(biāo)板來移除孔內(nèi)所有液體。此過程也可采用噴射瓶，多道移液器 或自動(dòng)洗板機(jī)來完成。1.3每孔加入200ul封閉液封閉，37℃溫育1.5小時(shí)。1.4 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板1次，方法同步驟1.2。酶標(biāo)板包被抗體完成。2、實(shí)驗(yàn)流程2.1按說明書推薦的方法稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品工作液......

競(jìng)爭(zhēng)抑制 ELISA ，其主要原理是將標(biāo)本中的靶分子和一定量的靶分子標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)與酶標(biāo)板上固相抗體結(jié)合。 標(biāo)本中靶分子量愈多，結(jié)合在酶標(biāo)板上的靶分子標(biāo)記物愈少，最后的顯色也愈淺，也就是說，顯色的深淺與樣本中靶分子含量成負(fù)相關(guān)。小分子類激素、小分子藥物等 ELISA 測(cè)定多用此法。這是因?yàn)樾》肿影肟乖蚨嚯陌肟乖?，缺乏兩個(gè)以上的抗體結(jié)合位點(diǎn)，無法形成雙抗體夾心結(jié)果，對(duì)用競(jìng)爭(zhēng)抑制法定量檢測(cè)。如何分析檢測(cè)數(shù)據(jù)測(cè)算結(jié)果呢？在這里為大家推薦一種方法，用EXCEL 軟件即可完成結(jié)果測(cè)算。1、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方法以云克隆公司的去甲......

免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟1. 樣本制備包括陽性和陰性對(duì)照樣本制備（含細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞刺激、動(dòng)物模型等）；其中樣本的制備要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇新鮮，完整的材料，并且取材后應(yīng)立即固定，這是制片關(guān)鍵的一步；2. 抗原或抗體的標(biāo)記（選擇特異性高的抗體，每種抗體要經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最適濃度后進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn))；3. 細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器的特殊染色；4. 封片鏡下觀察。結(jié)果展示（一）細(xì)胞形態(tài)觀察鬼筆環(huán)肽染色細(xì)胞骨架，綠色為微絲結(jié)構(gòu)（二）細(xì)胞自噬觀察熒光自噬雙標(biāo)病毒感染細(xì)胞紅色斑點(diǎn)是自噬溶酶體（mRFP），黃色斑點(diǎn)是自噬體（RFP+GFP）

蛋白活性實(shí)驗(yàn)-SCF活性蛋白干細(xì)胞因子(SCF)，也稱為肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(MGF)和鐵因子(SLF)，在造血、精子和黑色素生成中起著重要作用。SCF已被證明可以刺激TF-1細(xì)胞的增殖。實(shí)驗(yàn)方法：測(cè)試這種效果,將TF-1細(xì)胞被接種在96 孔板上，密度1 x 104細(xì)胞/孔，重復(fù)3孔。在不同濃度SCF中37°C孵育72 h，檢測(cè)不同濃度的SCF。在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)，細(xì)胞計(jì)數(shù)以細(xì)胞計(jì)數(shù)(CCK-8)測(cè)定細(xì)胞增殖。簡(jiǎn)要來說，每孔添加10μl CCK-8，于37°C孵育1 - 4小時(shí)，然后在450 nm處測(cè)量吸光度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：用倒置顯微鏡觀察添加SCF孵育72h后，TF-1細(xì)胞的細(xì)胞增......