Elisa 是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對(duì)于 Elisa 實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì) 影響到 Elisa 實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。上節(jié)我們介紹了血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì) 胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等常見樣本的處理方法，這一節(jié)我們將會(huì)介紹皮膚組 織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰 道分泌物等特殊樣本的處理方法，供研究者參考。1、痰液1）選擇痰液中較為粘稠部分稱重，加兩倍于痰量的 0.1% DTT(二硫蘇糖醇)， DTT 的主要作用是溶解粘液，......

眾所周知，在基因工程領(lǐng)域，常用的表達(dá)系統(tǒng)共有三種，包括：原核表達(dá)系統(tǒng) (大腸桿菌 E. coli 表達(dá)系統(tǒng))、酵母表達(dá)系統(tǒng)(P. Pichia 表達(dá)系統(tǒng))和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表 達(dá)系統(tǒng)。原核表達(dá)系統(tǒng)由于操作簡(jiǎn)單、成本低廉、表達(dá)效率高等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用 于外源基因的蛋白表達(dá)。但同時(shí)，原核表達(dá)體系也有一些自身的缺點(diǎn)，比如容易形 成包涵體，不能進(jìn)行翻譯后加工等等。為了盡量避免原核表達(dá)系統(tǒng)自身的不足，Cloud-Clone Corp.又另外開發(fā)建立了 酵母表達(dá)平臺(tái)。酵母表達(dá)外源基因具有一定的翻譯后加工能力，收獲的外源蛋白質(zhì) 具有一定程度上的折疊加工......

ELISA 試劑盒（簡(jiǎn)稱試劑盒）的穩(wěn)定性是指試劑盒在生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定界限內(nèi)保 持其特性的能力。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的和條件不同，穩(wěn)定性試驗(yàn)可分為加速穩(wěn)定性試驗(yàn) 和長(zhǎng)期試驗(yàn)。加速穩(wěn)定性試驗(yàn)，通常在 37 度下進(jìn)行，用于加快試劑盒中的生物試劑的化學(xué) 或物理變化速度考察試劑盒的穩(wěn)定性?？蓪?duì)試劑盒在運(yùn)輸、保存過(guò)程中可能會(huì)遇到 的短暫的超常條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行模擬考察，并初步預(yù)測(cè)試劑盒在規(guī)定的儲(chǔ)存條件 下長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定性。取有效期內(nèi)的試劑盒，在 37 度分別破壞 24 小時(shí)和 72 小時(shí)，檢測(cè)試劑盒的回 收率、線性和精密度，判斷試劑盒的有效性......

通常意義上來(lái)說(shuō)，小分子是指分子量很小的化合物，一般分子量小于 1000 道爾頓（Dalton，Da）。在生物學(xué)領(lǐng)域，常見的小分子包括：多肽、多糖、氨基 酸、核苷酸等；其中也包括食品安全中涉及的“瘦肉精”、“三聚氰胺”等； 以及醫(yī)學(xué)檢測(cè)中的激素等。由于小分子通?；瘜W(xué)組分單一，化學(xué)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單且分子量小，所以不具備免 疫原的基本化學(xué)特性。因此，小分子直接免疫動(dòng)物是不能激發(fā)免疫應(yīng)答而獲得 特異性抗體的，常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法也很難對(duì)其進(jìn)行定量檢測(cè)?，F(xiàn)有的針對(duì) 小分子定量檢測(cè)的方法主要為高效液相色譜法......

眾所周知，對(duì)于具有多個(gè)表位的抗原而言，雙夾心 ELISA（Double Sandwich ELISA）可應(yīng)用于目標(biāo)抗原或抗體的定量檢測(cè)。而對(duì)于小分子抗原或半抗原，因缺 乏可作夾心法的兩個(gè)以上的結(jié)合位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定。此時(shí)， 可以采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法模式來(lái)檢測(cè)其中靶分子的含量。競(jìng)爭(zhēng)抑制 ELISA 又叫封閉 ELISA，其主要原理是將標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合。 標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，最后的顯色也愈淺，也就 是說(shuō)，最終顯色的結(jié)果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負(fù)相關(guān)。小分子激素......

蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）是根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理檢測(cè)復(fù)雜樣本 中的某種蛋白的方法。將混合抗原樣本在凝膠板上進(jìn)行單向或雙向電泳，經(jīng)過(guò) PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白 質(zhì)，且能保持電泳分離的類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽 作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與或標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯 色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)廣泛應(yīng) 用于鑒定蛋白以及對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。蛋白質(zhì)印跡分為蛋白質(zhì)......

Elisa 是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對(duì)于 Elisa 實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。利用 ELISA 進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括常 見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的 皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精 液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì)影響到 Elisa 實(shí) 驗(yàn)的結(jié)果。下面我們就常見的樣本處理方法，供研究者參考。1、 血液樣本血液采取后應(yīng)盡快進(jìn)行處理，使血清（漿）從與血細(xì)胞接觸的全血中分離 出來(lái)。血清與......

ELISA 實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)者經(jīng)常會(huì)遇到樣本測(cè)值低的問題，樣本類型包括血清、 血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液等。假設(shè)客戶的操作完全正確，標(biāo)準(zhǔn)曲線良好， 這種情況樣本測(cè)值低可從兩方面進(jìn)行分析：一是樣本本身含量可被檢測(cè)，但由 于實(shí)驗(yàn)操作等原因?qū)е聵颖緶y(cè)值不在試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)；二是分析物在樣品中 本身濃度偏低。下面將從這兩個(gè)方面來(lái)進(jìn)行分析導(dǎo)致樣本測(cè)值低的因素以及對(duì) 應(yīng)的解決方案。1.樣本本身含量可以被檢測(cè)，有哪些原因?qū)е聹y(cè)值低呢？1）試劑盒的保存試劑盒要按照規(guī)定的方法保存，實(shí)驗(yàn)者在購(gòu)買試劑盒時(shí)請(qǐng)務(wù)必留心試劑盒 不同組......