在上期專(zhuān)題中我們講到小分子半抗原的結(jié)構(gòu)修飾，這期我們將展開(kāi)講述載體蛋白的選擇以及偶聯(lián)方法。載體蛋白是一種自身就能引發(fā)免疫反應(yīng)的大分子，許多不同種類(lèi)的載體蛋白與小分子偶聯(lián)后可制備成完全的抗原。常用的載體包括牛血清白蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白、卵清蛋白、牛甲狀腺球蛋白等。對(duì)于載體蛋白的選擇，主要涉及其溶解性、大小、偶聯(lián)基團(tuán)、免疫原性、成本價(jià)格等因素。目前市面上應(yīng)用最為廣泛的是牛血清白蛋白BSA(三維結(jié)構(gòu)如圖1)，主要是由于BSA化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易變性，分子內(nèi)含有多種氨基，且賴(lài)氨酸含量高，廉價(jià)易得。但BSA由于在一......

要制備小分子半抗原的抗體，首先對(duì)小分子的結(jié)構(gòu)有一定的要求，需要一定的復(fù)雜性或剛性，如含有苯環(huán)、雜環(huán)基團(tuán)或者有分支結(jié)構(gòu)，否則難以產(chǎn)生抗體或產(chǎn)生的抗體效價(jià)也較低。一些小分子半抗原若具有活性基團(tuán)，如-COOH、-NH2、-OH等，可以直接跟載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)，制備完全的人工抗原（如偶聯(lián)原理圖1）。如果半抗原沒(méi)有可直接與載體共價(jià)連接的基團(tuán)，或雖有活性基團(tuán)但這些基團(tuán)對(duì)維系半抗原的免疫特性和特征結(jié)構(gòu)十分重要，或直接與載體蛋白連接后半抗原的特征結(jié)構(gòu)易受載體的局部微化學(xué)環(huán)境或空間位阻的干擾影響機(jī)體的免疫反應(yīng)，則必須要對(duì)......

傳統(tǒng)的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)經(jīng)過(guò)不斷的改進(jìn)優(yōu)化，具有生產(chǎn)周期短、效率高、成本低等一系列的優(yōu)點(diǎn)，但是也存在系統(tǒng)自身的缺陷性，除了無(wú)法完成真核蛋白的折疊與修飾外，至今人們利用該系統(tǒng)仍無(wú)法解決膜蛋白以及一些毒性蛋白表達(dá)，嚴(yán)重制約著大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的應(yīng)用。為彌補(bǔ)原核表達(dá)系統(tǒng)的不足，人們常用真核表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)重組蛋白，但是真核表達(dá)系統(tǒng)步驟繁瑣、周期長(zhǎng)、蛋白產(chǎn)量低、費(fèi)用高等一系列問(wèn)題，也給真核表達(dá)系統(tǒng)的推廣應(yīng)用設(shè)置了一個(gè)比較高的門(mén)檻。目前，隨著人們對(duì)蛋白表達(dá)系統(tǒng)研究的不斷深入，使得蛋白的無(wú)細(xì)胞表達(dá)從可能變成......

精密度，表示在相同條件下，同一樣本的重復(fù)測(cè)定值之間的符合程度，作為檢測(cè)系統(tǒng)的基本分析性能之一，是評(píng)判檢測(cè)系統(tǒng)有效性的評(píng)價(jià)基礎(chǔ)。那么，如何測(cè)定檢測(cè)ELISA試劑盒的精密度呢？ELISA試劑盒的精密度分為批內(nèi)精密度和批間精密度。精密度用樣品測(cè)定值的變異系數(shù)CV表示。。批內(nèi)精密度：取同批次試劑盒對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測(cè)，每份樣本連續(xù)測(cè)定20 次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值（Mean）及SD值。計(jì)算公式如下：批間精密度：選取3個(gè)不同批次的試劑盒分別對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量測(cè)定，每個(gè)樣本使用同一試劑盒重......

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)疾病認(rèn)識(shí)的進(jìn)一步深入，發(fā)現(xiàn)人類(lèi)很多疾病的發(fā)病原因與基因突變有著密不可分的關(guān)系。那么如何去治療這些疾病呢？人們自然想到了采用一些技術(shù)手段對(duì)突變的基因序列進(jìn)行重新編輯，以期達(dá)到治愈的目的，這項(xiàng)技術(shù)就是基因編輯技術(shù)。基因編輯技術(shù)經(jīng)過(guò)了以歸巢酶，ZFN，TALEN等以蛋白質(zhì)與DNA識(shí)別與切割為原理的第一代基因編輯技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)基因編輯技術(shù)的認(rèn)識(shí)不斷加深，但是由于第一代基因編輯技術(shù)操作步驟繁瑣、基因編輯效率低下、基因編輯脫靶現(xiàn)象嚴(yán)重等問(wèn)題，很難應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。2003年，MIT小組首次利......

磁珠化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定，是集磁珠分離技術(shù)，靈敏的化學(xué)發(fā)光分析和特異的抗原抗體免疫測(cè)值與一體的檢測(cè)技術(shù)。其中磁珠化學(xué)發(fā)光雙抗夾心酶免疫測(cè)定法用酶標(biāo)記抗體，代測(cè)標(biāo)本中目的抗原，以及磁顆?？贵w形成夾心結(jié)構(gòu)，通過(guò)磁場(chǎng)把結(jié)合狀態(tài)（復(fù)合物：酶標(biāo)記抗體+目的抗原+磁顆?？贵w）和游離狀態(tài)的非目的物以及酶標(biāo)記抗體分離開(kāi)，加入發(fā)光底物進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)，通過(guò)對(duì)發(fā)光強(qiáng)度的檢測(cè)進(jìn)行定量或定性測(cè)定。此技術(shù)屬于酶免疫測(cè)定的一種。區(qū)別于酶聯(lián)免疫定量檢測(cè)試劑盒，最后一步酶反應(yīng)所用的底物為發(fā)光劑，通過(guò)發(fā)光反應(yīng)發(fā)出的光在特定的儀器上......

前期專(zhuān)題我們介紹了MAPK級(jí)聯(lián)激活通路，主要包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)控的蛋白激酶（ERK）、c- Jun N端激酶（JNK）、P38MAPK以及ERK5 四條途徑，后3條均屬于應(yīng)激激活MAPK通路，其中ERK5通路作為一種非典型的 MAPK 通路，它的發(fā)現(xiàn)是比較晚的，但是研究卻很活躍。ERK5 由 816 個(gè)氨基酸構(gòu)成，長(zhǎng)度幾乎是其他 MAPK 家族成員的 2 倍。ERK5 的N 末端包含有蛋白激酶區(qū)， C末端有一個(gè)獨(dú)特的 COOH，這有別于 MAPK 家族的其他成員，如圖1是ERK5的三維結(jié)構(gòu)。ERK5 的級(jí)聯(lián)反應(yīng)也是由 3 個(gè)相應(yīng)順序激活: 各種刺激因素激活 MEKK2 /3，再由 MEKK2 /3激活MEK5......

酸性α- 葡萄糖苷酶 (Glucosidase Alpha, Acid, GaA)，為淀粉水解酶類(lèi)的一種。它能催化多糖水解，產(chǎn)生α- D-葡萄糖。同時(shí)它也具有轉(zhuǎn)糖苷作用，可將低聚糖中的α-1，4-糖苷鍵轉(zhuǎn)化成α-1，6-糖苷鍵或其他形式的鏈接，從而得到非發(fā)酵性的低聚異麥芽糖或糖酯、糖肽等。當(dāng)位于第17號(hào)染色體上編碼酸性α-葡糖苷酶的基因突變，造成體內(nèi)酸性α- 葡萄糖苷酶缺乏，糖原無(wú)法正常代謝，導(dǎo)致體內(nèi)糖原在骨骼肌、心肌和平滑肌等肌肉組織內(nèi)大量集聚，導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)肌肉病變。這種溶酶體貯積癥，被稱(chēng)為龐貝病，也稱(chēng)為酸性α -葡糖苷酶缺乏癥或II型糖原貯積......